植酸酶基因phyA轉化大豆及轉基因新材料創(chuàng)制.pdf

1、土壤磷多以有機態(tài)形式存在,其中植酸磷占50％以上,分解利用植酸態(tài)磷是提高土壤磷利用效率、改善植物磷營養(yǎng)的重要途徑。植酸酶可有效水解土壤中的植酸態(tài)磷,釋放出無機磷酸及其鹽類,提高植物對土壤中有機磷的利用率。本研究以無花果曲霉中的植酸酶phyA為轉化基因,通過構建表達載體,轉化不同大豆品種,獲得了轉基因新材料。具體研究結果如下:
　　 1.采用農(nóng)桿菌介導技術將phyA基因分別轉化大豆品種冀豆12和冀豆16,獲得了轉基因新材料。其中,

2、冀豆12T0代陽性植株30株、T1代58株(8個株系)、T2代23株(3個株系)、T3代2株(1個株系),并已收獲T4代種子;冀豆16T0代陽性植株1株、T1代5株、T2代1株,并已收獲T3代種子。
　　 2.采用花粉管通道轉化技術將phyA線性片段轉化大豆品種冀豆12和五星1號,獲得了陽性材料。其中,冀豆12T0代植株58株、T1代28株(9個株系)、T2代19株(5個株系)、T3代17株(4個株系)、T4代5株(1個株系);

3、五星1號T0代14株、T1代1株,并已收獲T2代種子。同時,采用該技術將載體phyA轉入冀豆12和五星1號,分別獲得冀豆12T0代植株65株,五星1號T0代5株,并已收獲T1代種子。
　　 3.構建phyA的無標記(Marker-free)表達載體pX6-phyA,經(jīng)農(nóng)桿菌介導子葉節(jié)技術轉化大豆品種鄭92116,獲得T0代陽性植株2株;經(jīng)花粉管通道技術轉入五星2號,獲得T0代陽性植株3株。
　　 4.分析了轉phyA大豆

4、新材料在植酸磷條件下根系分泌植酸酶活性。3個轉基因株系在植酸磷處理下根系分泌植酸酶活性分別比野生型大豆提高5%、13%和24%。其中,2號和3號株系與野生型大豆差異分別達到0.05和0.01顯著水平。
　　 5.通過分析轉phyA大豆新材料根際周圍土壤微生物含量發(fā)現(xiàn),在幼苗期、開花期和結莢期,轉phyA大豆新材料的根際周圍土壤微生物(真菌、細菌和放線菌)含量與野生型對照沒有明顯差異,說明phyA的轉入并未影響大豆植株根際周圍的土