鴉膽子粗提物、臭椿粗提物和Y-D對(duì)TMV、CMV-RNA的抑制作用.pdf

1、煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)在世界范圍內(nèi)都有分布，可侵染十字花科、茄科、菊科等多種植物，是具有經(jīng)濟(jì)重要性的植物病毒之一。黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)的寄主十分廣泛，能侵染85科1000多種植物。TMV可以與CMV復(fù)合侵染，不僅造成植物品質(zhì)的下降同時(shí)可以造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。TMV、CMV引起的病毒病不但危害嚴(yán)重，其防治也相當(dāng)困難。 鴉膽子(Brucea ja

2、vanica(L.)Merr)、臭椿(Ailanthus altissima Swingle)均系苦木科(Simaroubaceae)植物果實(shí)，為傳統(tǒng)中藥。在本實(shí)驗(yàn)室以前的研究中，已經(jīng)得出，在接種TMV 6-8h后的普通煙K326，1.0 mg/mL的鴉膽子和臭椿粗提物處理的病毒增殖抑制率分別為90.9％和89.4％；分別利用半葉法和葉碟法測(cè)定了鴉膽子素D的抗TMV侵染和增殖作用，結(jié)果為，在0.025mg/mL濃度下抗TMV侵染效果達(dá)到

3、75％以上，而在2x10-3mg/mL的濃度下其抗TMV增殖作用仍達(dá)到60％。 Brtlticine D(Y-D)、鴉膽子粗提物和臭椿粗提物對(duì)TMV有很好的抑制增殖的作用，為了研究Y-D、鴉膽子粗提物和臭椿粗提物對(duì)TMV核酸、CMV核酸在寄主體內(nèi)的增殖情況的影響，本實(shí)驗(yàn)采用了semi-quantitive RT-PCR的方法，對(duì)TMV-RNA的復(fù)制酶基因、外殼蛋白基因(CP)、運(yùn)動(dòng)蛋白基因(MP)、煙草內(nèi)參基因(actin ge

4、ne)和CMV-RNA3分別進(jìn)行了退火溫度優(yōu)化、Mg2+濃度優(yōu)化、循環(huán)次數(shù)優(yōu)化，進(jìn)一步研究接種TMV 6h的普通煙K326和接種CMV 12h的假酸漿(Nicandra physalodes(L.)Gaertner)，用Y-D、鴉膽子粗提物和臭椿粗提物對(duì)其處理48h，檢測(cè)三種藥劑對(duì)TMV、CMV的RNA的抑制作用。同時(shí)采用quantitivereal-time PCR的方法，檢測(cè)Y-D對(duì)TMV-RNA、CMV-RNA的抑制作用，對(duì)TMV

5、基因組、TMV-CP亞基因組和TMV-MP亞基因組的抑制率分別為93.04％、94.79％和95.82％。兩種方法的結(jié)果是相同的，不僅確定了Bruceine D、鴉膽子粗提物、臭椿粗提物對(duì)寄主體內(nèi)的TMV-RNA的增殖有很強(qiáng)的抑制作用。同時(shí)證明了semi-quantitative RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性，證明了semi-quantitative RT-PCR技術(shù)的可靠性，在相對(duì)定量的研究中，由于熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀價(jià)格昂貴，當(dāng)條件