13-17羅伯遜易位豬染色體瑞粒的研究.pdf

1、端粒是存在于線(xiàn)狀染色體末端的DNA重復(fù)序列，它是線(xiàn)狀染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，由富含GC堿基的DNA簡(jiǎn)單重復(fù)序列及端粒結(jié)合蛋白共同構(gòu)成。端粒具有維持染色體末端結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，防止染色體間末端連接，并且可補(bǔ)償滯后鏈5'末端在消除RNA引物后所造成的空缺的生物學(xué)功能。端粒DNA在染色體上的組成及變化一直都是生物研究的一個(gè)重要方面，對(duì)13/17羅伯遜易位染色體端粒的研究可以為研究羅伯遜易位的相關(guān)遺傳機(jī)理提供研究資料。
　　 本研究采用Hae

2、Ⅲ和HinfI內(nèi)切酶對(duì)提取的豬組織基因組DNA樣進(jìn)行雙酶切，將酶切產(chǎn)物進(jìn)行回收連接，根據(jù)已知的端粒簡(jiǎn)單重復(fù)序列(TTAGGG)n，通過(guò)Primer5.0設(shè)計(jì)出三條引物，以連接產(chǎn)物為模板進(jìn)行兩次PCR，純化回收PCR產(chǎn)物，將其連接到pMD18-T載體上，挑取陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。將得到的端粒簡(jiǎn)單重復(fù)序列作為探針，采用地高辛隨機(jī)引物標(biāo)記法標(biāo)記探針，對(duì)13/17羅伯遜易位豬的染色體標(biāo)本片進(jìn)行熒光原位雜交，以檢測(cè)羅伯遜易位染色體新著絲粒區(qū)域是否存在

3、端粒簡(jiǎn)單重復(fù)序列。陽(yáng)性克隆子的測(cè)序結(jié)果顯示，95～341bp為端粒簡(jiǎn)單重復(fù)序列，因此采用此246bp序列作為熒光原位雜交的探針。熒光原位雜交的檢測(cè)結(jié)果顯示，在染色體的兩端顯示雜交信號(hào)，但在13/17羅伯遜易位染色體著絲粒區(qū)域不顯示雜交信號(hào)，說(shuō)明在13/17羅伯遜易位染色體著絲粒部位發(fā)生了端粒序列的缺失。
　　 定位出13/17羅伯遜易位新染色體融合部位發(fā)生了端粒序列的缺失，可為進(jìn)一步研究端粒序列的缺失對(duì)13/17羅伯遜易位豬的生