家豬13-17羅伯遜易位染色體著絲粒的研究.pdf

1、著絲粒是細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂過(guò)程中，保證染色體正常分裂、分離到子細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能元件。它參與減數(shù)分裂中同源染色體的配對(duì)、姊妹染色單體的連接與細(xì)胞分裂后期的分離及細(xì)胞分裂后期啟動(dòng)的調(diào)控。染色體運(yùn)動(dòng)和分離的分子機(jī)制的研究是遺傳學(xué)的熱點(diǎn)課題。因此，著絲粒的研究也是染色體功能研究的焦點(diǎn)之一。研究認(rèn)為染色體的分離機(jī)制在真核生物中是保守的。過(guò)去認(rèn)為這種保守性來(lái)自于DNA序列的特化，現(xiàn)在研究顯示著絲粒的功能是保守的，但組成著絲粒的DNA和蛋白質(zhì)在不

2、斷進(jìn)化。
　　 豬著絲粒DNA重復(fù)序列分為兩個(gè)家族，即MC1和AC2。MC1是由340bp的重復(fù)單體串聯(lián)組成，分布于豬的中或亞中著絲粒染色體(1-12)和X染色體上，而AC2主要是由14bp單體構(gòu)成的重復(fù)序列組成，位于所有的端著絲粒染色體(13-18)上，目前還沒有獲得豬Y染色體著絲粒DNA重復(fù)序列的報(bào)道。
　　 本研究采用微量全血培養(yǎng)法制備13/17羅伯遜易位豬染色體標(biāo)本片，通過(guò)顯微切割方法獲得13/17羅伯遜易位染色

3、體著絲粒區(qū)域。經(jīng)兩輪DOP-PCR擴(kuò)增獲得100bp～2000bp左右的連續(xù)帶。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后用T載體克隆方法構(gòu)建該區(qū)域DNA文庫(kù)。用NCBI及DNAMAN等軟件分析該文庫(kù)序列分析。用克隆質(zhì)粒作為探針前體，采用PCR法將Dig-dUTP隨機(jī)插入DNA中，而使DNA被標(biāo)記，通過(guò)熒光原位雜交方法從文庫(kù)中篩選出豬13/17羅伯遜易位染色體著絲粒特異性序列091026。表明著絲粒DNA在進(jìn)化演變過(guò)程中產(chǎn)生特異性序列。
　　 獲得豬13