2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、因基因槍共轉(zhuǎn)化法具有無(wú)宿主限制和不受季節(jié)時(shí)間的限制、簡(jiǎn)單易操作等優(yōu)點(diǎn),目前基因槍共轉(zhuǎn)化法約占所有轉(zhuǎn)基因作物65%以上。采用最小表達(dá)框技術(shù)轉(zhuǎn)化植物,只導(dǎo)入了包含啟動(dòng)子、編碼序列及終止子的表達(dá)框序列,不含載體骨架序列,規(guī)避了可能由骨架序列引起的安全風(fēng)險(xiǎn)。核基質(zhì)結(jié)合區(qū)序列 SAR(scaffold attachment region)是真核細(xì)胞核的重要組成部分,主要充當(dāng)遺傳信息的傳播和轉(zhuǎn)錄的功能,具有增強(qiáng)鄰近元件的配合,使兩個(gè) SAR之間的基

2、因片段被界定成一個(gè)獨(dú)立的染色質(zhì)環(huán)狀結(jié)構(gòu),從而阻擋鄰近染色質(zhì)區(qū)作用與影響可以提高目的基因的表達(dá)特性。為了提高外源基因表達(dá)的穩(wěn)定性,本研究通過在最小表達(dá)框序列兩端添加 SAR序列,構(gòu)建了表達(dá)載體,建立了適合小麥轉(zhuǎn)化的最小表達(dá)框轉(zhuǎn)化技術(shù)體系。本研究中,首先,以 GUS為目的基因,除草劑抗性基因 Bar為篩選標(biāo)記基因,對(duì) pSGUS載體進(jìn)行驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上,為了創(chuàng)制抗旱轉(zhuǎn)基因小麥新種質(zhì),以來自大豆的抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因 GmDREB3為目的基因

3、,Bar基因?yàn)楹Y選標(biāo)記基因,對(duì)濟(jì)麥22、石366、石 B074056、石15四個(gè)受體進(jìn)行轉(zhuǎn)化,具體結(jié)果如下:
  1.科農(nóng)199為受體進(jìn)行了基因槍共轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),轟擊 l067個(gè)幼胚,獲得40株再生植株,PCR檢測(cè)獲得陽(yáng)性植株9株。隨機(jī)取4株(編號(hào)為 M2-1、M2-2、M2-3和M2-4)進(jìn)行報(bào)告基因 GUS染色,均在幼根組織染色。進(jìn)一步對(duì)該4個(gè)株系的T1代的胚乳(隨機(jī)取3粒)和小花(隨機(jī)取3朵)進(jìn)行報(bào)告基因 GUS表達(dá)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在

4、胚乳和小花均能檢測(cè)到 GUS的表達(dá),表明利用改良的最小表達(dá)框轉(zhuǎn)化技術(shù),外源基因可以在受體中穩(wěn)定表達(dá)。
  2.GmDREB3基因轉(zhuǎn)化受體小麥濟(jì)麥22,通過 PCR檢測(cè)獲得陽(yáng)性植株30株,隨機(jī)取6株進(jìn)行 RT-PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)外源基因均能在轉(zhuǎn)錄水平上得到表達(dá),進(jìn)一步通過 real-time PCR分析轉(zhuǎn)基因植株的拷貝數(shù),結(jié)果顯示所得到的陽(yáng)性植株含有較低的拷貝數(shù)。以上結(jié)果表明,在最小表達(dá)框兩端加上 SAR序列后,可以顯著提高轉(zhuǎn)化片段的

5、完整性及穩(wěn)定性,減少目標(biāo)基因整合的拷貝數(shù)。
  3.為確定受體對(duì)載體片段的影響及不同受體的表達(dá)水平,GmDREB3基因近一步轉(zhuǎn)濟(jì)麥22、石366、石 B074056、石15受體小麥,陽(yáng)性率分別為:0.53%,0.80%,0.99%和0.31%,表明以石 B074056為受體轉(zhuǎn)化效率最高,可見不同受體對(duì)加 SAR序列最小表達(dá)框轉(zhuǎn)化率也有影響。
  4.經(jīng)過對(duì)以濟(jì)麥20為受體的轉(zhuǎn)基因 GmDREB1材料 MG3a、MG7和MG1

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