豬致病性鏈球菌快速檢測方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、本研究從33例臨床癥狀疑似豬鏈球菌感染豬的全血及內(nèi)臟器官中分離出16株球菌，經(jīng)過形態(tài)學(xué)檢查、溶血試驗(yàn)、生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)鑒定出11株具有致病性的豬鏈球菌。為了對豬鏈球菌進(jìn)行快速檢測和分型，針對豬鏈球菌谷氨酸脫氫酶蛋白(GlutamateDehydrogenase，gdh)基因、2型特異的莢膜多糖(capsular polysaccharide，cps2J)、溶菌酶釋放蛋白(muramidase-released protein，mrp)

2、、胞外蛋白因子(extracellular protein factor，ef)基因、9型特異的gdh、cps9H基因和1型cpslI基因、7型cps7基因，分別建立了豬鏈球菌屬特異性PCR檢測方法、2型多重PCR檢測方法、9型多重PCR檢測方法和1型、7型、9型多重PCR檢測方法以及豬鏈球菌9型TaqMan熒光定量PCR檢測方法(TaqmanFQ-PCR)，并對分離的33株細(xì)菌分別進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示，屬特異性PCR檢測11株豬鏈球菌

3、均為gdh陽性，2型多重．PCR．檢測11個(gè)gdh陽性菌株均為陰性，9型多重PCR檢測11個(gè)gdh陽性菌株3個(gè)為陽性，豬鏈球菌9型TaqMan熒光定量PCR檢測11個(gè)gdh陽性菌株3個(gè)為陽性，1型、7型、9型多重PCR檢測11個(gè)gdh陽性菌株3個(gè)為豬鏈球菌9型陽性，且與9型TaqMan熒光定量PCR檢測結(jié)果一致。其中，F(xiàn)Q-PCR方法檢測靈敏度比常規(guī)PCR高100倍，可達(dá)1拷貝/μ L，而且特異性高、重復(fù)性好，對pGEX-T-cps9H