四川錦葵(Malva parviflora)上雙生病毒的鑒定及變異分析.pdf

1、在植物病毒中,雙生病毒是唯一一類具有孿生顆粒形態(tài)的單鏈環(huán)狀DNA病毒,多發(fā)生在熱帶和亞熱帶地區(qū)。根據(jù)昆蟲介體、基因組結(jié)構(gòu)和寄主范圍的不同,雙生病毒科可劃分為四個(gè)屬:菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)、甜菜曲頂病毒屬(Curtovirus)、玉米線條病毒屬("Mastrevirus)及番茄偽曲頂病毒屬(Topocuvirus)。其中,菜豆金色花葉病毒屬病毒在自然狀態(tài)下可由煙粉虱以持久性方式傳播,因此該屬病毒也稱作粉虱傳雙生病毒(

2、Whitefly-transmittedgcminivirus,WTG)。該屬病毒分布廣泛,危害嚴(yán)重,至今已給39個(gè)國(guó)家的作物生產(chǎn)造成了毀滅性災(zāi)害。近年來,在我國(guó)云南、海南、廣東、廣西和福建等省的煙草、番茄、番木瓜等作物和雜草上相繼發(fā)現(xiàn)了多種雙生病毒。由于四川省已有雙生病毒侵染番茄、辣椒等經(jīng)濟(jì)作物和賽葵等雜草的報(bào)道,鑒于雜草是雙生病毒的重要中間寄主和初侵染源,為了明確四川錦葵上雙生病毒的種類,本文對(duì)四川錦葵黃脈病的病原進(jìn)行了分子鑒定,并

3、對(duì)其基因組結(jié)構(gòu)及變異進(jìn)行了分析。
　　 2010年,我們?cè)谒拇ㄅ手ǖ貐^(qū)采集了10份表現(xiàn)明顯黃脈癥狀的錦葵樣品,利用雙生病毒通用引物PA和PB,對(duì)錦葵樣本進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn):10份樣品中有9份擴(kuò)增出約500bp的條帶(樣品SC193未擴(kuò)增到),說明這些雜草上存在雙生病毒侵染。選取部分樣品進(jìn)行RCA-PCR后,SC193也擴(kuò)增到500bp片段,說明10份樣品都受到雙生病毒侵染。PCR產(chǎn)物測(cè)序后進(jìn)行序列比較表明,這些樣品可能受

4、兩種雙生病毒侵染,即:中國(guó)番茄黃化曲葉病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus,TYLCCNV)和云南賽葵黃脈病毒(MalvastrumyellowveinYunnanvirus,MYVYNV)。
　　 在此基礎(chǔ)上,任選樣品SC176、SC224和SC226對(duì)其全基因組進(jìn)行了擴(kuò)增。其中,SC176和SC226-1的DNA-A全序列分析結(jié)果表明:SC176和SC226-1全長(zhǎng)分別為2737bp和2738b

5、p,具有典型的雙生病毒DNA-A基因組結(jié)構(gòu);序列比較分析發(fā)現(xiàn),兩者之間相似性為96.9%,且均與TYLCCNV的分離物TYLCCNV-TbY25相似性最高,分別為98.2%和97.1%;說明它們是TYLCCNV的不同分離物。對(duì)SC224和SC226-2的DNA-A進(jìn)行全序列測(cè)定,結(jié)果表明:SC224和SC226-2全長(zhǎng)分別為2747bp和2748bp,具有典型的雙生病毒DNA-A基因組結(jié)構(gòu);兩者之間序列相似性為99.2%,均與MYVYN

6、V的相似性最高,分別為99.0%和99.3%;表明它們是MYVYNV的不同分離物。利用擴(kuò)增雙生病毒衛(wèi)星DNA[3的特異性引物Beta01和Beta02,從樣品SC176、SC224和SC226中均擴(kuò)增到約1300bp的條帶。序列分析表明:SC224γ和SC226β全長(zhǎng)分別為1356bp和1350bp,兩者之間相似性為99.0%,且均與MYVYNV伴隨的DNAβ(MYVYNB)相似性最高,分別為99.O%和99.1%。SC176β全長(zhǎng)為1

7、335bp,與TYLCCNV伴隨的DNAβ(TYLCCNB)相似性最高為85.8%。這些結(jié)果表明,樣品SC176受TYLCCNV單獨(dú)侵染;樣品SC224受MYVYNV獨(dú)侵染;樣品SC226受TYLCCNV和MYVYNV兩種病毒復(fù)合侵染;且樣品中存在兩類衛(wèi)星DNAβ分子,分別是MYVYNB及TYLCCNB。
　　 利用TYLCCNV和MYVYNV的特異引物分別對(duì)10份錦葵樣品進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果表明:10份樣品中有7份樣品能檢測(cè)到