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文檔簡介
1、用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(Rolling circle amplification,RCA)放大雙生病毒的靶核酸信號(hào)進(jìn)而利用限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(RFLP)建立了檢測(cè)不同類型雙生病毒的新技術(shù)體系。研究結(jié)果表明,利用RCA-RFLP以有效的檢測(cè)已知的單組份和雙組份以及伴隨有衛(wèi)星的雙生病毒。對(duì)采自浙江杭州地區(qū)的田間雙生病毒樣品的RCA-RFLP檢測(cè)的結(jié)果與利用簡并引物PA和PB進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果相吻合。相比傳統(tǒng)的PCR檢測(cè)方法,用RCA-RF
2、LP體系檢測(cè)雙生病毒靈敏性更高、操作更為簡便。 根據(jù)本氏煙中的NbAGO1和NbAGO4基因序列設(shè)計(jì)特異引物,利用RT-PCR在本氏煙擴(kuò)增了NbAGO1和NbAGO4基因的同源序列片斷,通過序列比較發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)片斷與公布的本氏煙中NbAGO1和NbAGO4類基因都有較高的同源性。將NbAGO1和NbAGO4片段引入改造的煙草脆裂病毒(TRV)RNA2沉默載體,獲得了重組載體pTRV2-AGO1和pTRV2-AGO4。將pTRV2-
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