2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文以水稻懸浮培養(yǎng)細胞為材料,研究磷脂酶C和磷脂酶D在木聚糖酶(Xylanase)誘導的水稻細胞抗病反應中的作用。
   我們用Xylanase(100μg/ml)處理繼代3-5天的水稻懸浮培養(yǎng)細胞,細胞濃度(0.05g/ml),發(fā)現(xiàn)PLDα和PLDβ的活性在處理初期都被迅速激活,并在1h內達到峰值。但是PLDα的活性在2h時又再次被激活,出現(xiàn)第二個峰值,而后活性下降,趨于對照值;而PLDβ的活性在1h出現(xiàn)峰值后就不斷下降,甚至

2、低于對照值。在RT-PCR實驗中,我們發(fā)現(xiàn),OsPLDα1的表達并沒有因為Xylanase的處理而發(fā)生改變,與對照組表達水平基本一致,但是OsPLDβ1的表達量的變化和它的活性變化趨勢基本一致,在處理初期迅速表達,而后逐漸下降。而OsPI-PLC1的表達卻是逐漸升高的趨勢,在處理12h時明顯高于對照。
   我們檢測了Xylanase處理條件下細胞中活性氧的情況,發(fā)現(xiàn)H2O2和O2的含量都發(fā)生了變化,H2O2出現(xiàn)了明顯的雙峰值,

3、而O2的積累量一直升高,但也能看出其產生速率有兩個峰值,基本都在1h和4h時。然后我們用不同濃度的PA處理細胞,發(fā)現(xiàn)隨著濃度的升高,ROS的含量也在不斷的升高。這說明Xylanase誘導的活性氧爆發(fā)與PLD和PLC的活性有關。隨后我們又反證,在處理前分別加入PLD的抑制劑1-Butanol和PLC的抑制劑Neomycin Sulfate,發(fā)現(xiàn)ROS爆發(fā)被抑制了。
   利用RT-PCR技術檢測抗病基因PR10α和OsChit-1

4、的表達與PLD和PLC之間的關系,發(fā)現(xiàn)XylanaSe能夠誘導PRIOα和OsChit-1的表達,但是只有PR10α的表達與PLC和PLD有關,PLC和PLD的活性被抑制后,PR10α的表達也降低,而OsChit-1的表達卻與PLC和PLD都沒有關系。
   在過敏性細胞死亡和細胞凋亡的實驗中我們都發(fā)現(xiàn)PLD和PLC能夠調控Xylanase誘導的細胞死亡和凋亡,PLD和PLC的活性被抑制后,細胞死亡和細胞凋亡都被緩解了。在檢測植

5、保素-櫻花素時,發(fā)現(xiàn)1-Butanol能夠抑制Xylanase誘導的細胞中櫻花素的合成,而Neomycin Sulfate沒有抑制這種作用,說明PLD參與并調控了植保素的合成。
   綜上所述,Xylanase能夠誘導水稻細胞中PLDα和PLDβ的活性表達,但是對基因OsPLDαl的表達沒有影響,而對OsPLDβ1和OsPI-PLC1的表達有誘導作用;PLD和PLC通過PA參與調控Xylanase誘導的水稻細胞中活性氧爆發(fā);PL

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