中國荷斯坦奶牛BLAD的分子檢測.pdf

1、白細胞粘附缺陷病(BovineLeukocyteAdhesionDeficiency,BLAD)是發(fā)生在荷斯坦牛群中的一種遺傳性免疫缺陷病，受常染色體上單個隱性基因控制，是近幾十年來奶牛育種中影響嚴(yán)重的疾病之一。患病牛主要表現(xiàn)為重復(fù)性感染和持續(xù)性嗜中性粒細胞數(shù)增多，患病牛犢發(fā)生早期死亡。致病機理為白細胞表面β2整合素表達缺陷，其分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)是CD18基因編碼區(qū)的第383位的腺嘌呤(A)突變?yōu)轼B嘌呤(G)，導(dǎo)致128位天門冬氨酸(D)被

2、甘氨酸(G)所取代。為準(zhǔn)確診斷患病牛(BLAD)和攜帶者(BL)，減少其為奶牛育種造成的經(jīng)濟損失，我們有必要建立一種快速、準(zhǔn)確、有效地BLAD的檢測方法。 本研究根據(jù)BLAD患病牛CD18基因編碼區(qū)序列第383位點的A/G突變，從而使TaqⅠ限制性酶切位點消失的原理，建立了一種準(zhǔn)確檢測奶牛BLAD的PCR-RFLP方法。針對A383G突變位點設(shè)計了一對引物，特異性擴增奶牛CD18基因含有上述點突變的片段，長度為324bp。經(jīng)限制

3、性內(nèi)切酶TaqⅠ酶切后，正常個體產(chǎn)生193bp和131bp的DNA條帶，而攜帶者產(chǎn)生193bp、131bp和324bp的DNA條帶，純合隱性個體仍為324bp。應(yīng)用該PCR-RFLP方法對116個中國荷斯坦奶牛進行了BLAD基因檢測，其中包括48頭母牛和68頭公牛，共檢測出2頭BLAD攜帶者公牛，8頭BLAD攜帶者母牛，沒有發(fā)現(xiàn)純合隱性突變基因個體。 基于以上結(jié)論，根據(jù)我國國情，我們對今后奶牛育種工作提出了一些建議。在奶牛育種工