中國荷斯坦奶牛衣原體多樣性研究.pdf

1、衣原體（Chlamydia spp.）是一種專性細胞內(nèi)寄生，介于細菌和病毒之間的微生物。衣原體具有獨特的發(fā)育周期，分為元體和始體兩種不同形態(tài)。元體有感染性，無繁殖能力，直徑0.2-0.4μm;始體有繁殖能力，無感染性，直徑0.9-1.0μm。衣原體科包括一個衣原體屬，下含11個衣原體種，包括肺炎衣原體（C.pneumoniae）、沙眼衣原體（C.trachomatis）、鸚鵡熱衣原體（C.psittaci）、豬衣原體（C.suis）、鼠

2、衣原體（C.muridarum）、流產(chǎn)衣原體（C.abortus）、豚鼠衣原體（C.caviae）、貓衣原體（C.felis）、家畜衣原體（C.pecorum）、鳥衣原體（C.avium）和家禽衣原體(C.gallinacea)。衣原體能夠感染哺乳動物、家禽和人類，大多數(shù)衣原體種具有較寬的宿主譜。肺炎衣原體、沙眼衣原體和鸚鵡熱衣原體是可以導致人類發(fā)病的重要衣原體。其中肺炎衣原體主要引起人和動物的呼吸系統(tǒng)感染;沙眼衣原體主要引起人的泌尿生

3、殖系統(tǒng)感染，還可以導致沙眼、結(jié)膜炎、嬰兒肺炎、淋巴肉芽腫;人感染鸚鵡熱衣原體時會出現(xiàn)類似流感和肺炎的癥狀，并伴隨著結(jié)膜炎和胃腸道疾病等，而間質(zhì)性肺炎可導致人的死亡。
　　感染牛的衣原體種主要有鸚鵡熱衣原體、家畜衣原體、流產(chǎn)衣原體和豬衣原體;而感染奶牛的主要有鸚鵡熱衣原體、家畜衣原體和流產(chǎn)衣原體。研究證實，奶牛感染衣原體引起的產(chǎn)奶量下降和奶產(chǎn)品質(zhì)量下降等可造成巨大的經(jīng)濟損失。中國關(guān)于牛衣原體的研究多數(shù)局限于血清學方面，而對于奶牛衣原

4、體多樣性的系統(tǒng)研究較少，甚至有些研究認為，牛衣原體病是單純地由鸚鵡熱衣原體感染所引起。為了對中國荷斯坦奶牛的衣原體多樣性進行研究，本試驗采用建立的FRET-qPCR方法，對來自11個省的1，450份中國荷斯坦奶牛和553份中國地方肉牛的血液樣品以及江蘇某奶牛場隨機選擇的108頭中國荷斯坦奶牛的陰道拭子、糞便、牛奶和血液樣品進行衣原體的檢測和分型等研究。
　　應用FRET-qPCR方法對中國11個省的牛衣原體多樣性研究表明，衣原體的

5、總陽性率為2.4％(48/2,003)。在1，450份中國荷斯坦奶牛血液樣品中，2.4％(35/1，450)為衣原體陽性，檢測到家禽衣原體、鸚鵡熱衣原體、家畜衣原體和肺炎衣原體，且存在鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體的混合感染。陽性樣品中，鸚鵡熱衣原體占31.4％(11/35)，肺炎衣原體占25.7％(9/35)，家禽衣原體占22.9％(8/35)，家畜衣原體占20.0％(7/35)。在采集的533份中國肉牛的血液樣品中，2.4％(13/533

6、)為衣原體陽性，檢測到肺炎衣原體(84.7％，11/13)和家禽衣原體(15.3％，2/13)。
　　在江蘇某奶牛場隨機選擇108頭奶牛進行糞便、陰道拭子、牛奶、血液樣品采集并用FRET-qPCR方法進行衣原體檢測和分型。結(jié)果表明，64.8％(70/108)的奶牛為衣原體陽性，檢測到4種衣原體，其中家畜衣原體是主導的衣原體種(75.7％，53/70)，還包括家禽衣原體(47.1％，32/70)，鸚鵡熱衣原體(10.0％，7/70)

7、和肺炎衣原體(4.3％，3/70)。在70頭衣原體陽性奶牛中，68.6％(48/70)的奶牛檢測到1種衣原體，28.5％(20/70)檢測到2種衣原體，2.9％(2/70)中檢測到3種衣原體。在奶牛的四種樣品中，糞便的陽性率最高，為72.9％(51/70)，主要為家畜衣原體(94.1％，48/51)，且存在和鸚鵡熱衣原體的混合感染(5.9％，3/51);陰道拭子樣品陽性率為38.6％(27/70)，檢測到家禽衣原體(88.9％，24/2

8、7)、肺炎衣原體(7.4％，2/27)和家畜衣原體(3.7％，1/27);牛奶樣品陽性率為11.4％(8/70)，檢測到家禽衣原體(62.5％，5/8)和鸚鵡熱衣原體(37.5％，3/8);血液樣品陽性率最低，為8.6％(6/70)，其中家禽衣原體占66.7％(4/6)，而鸚鵡熱衣原體、家畜衣原體和肺炎衣原體各占16.7％(1/6)。本試驗設(shè)計了針對不同衣原體ompA基因的種特異性PCR方法，進一步研究衣原體的多態(tài)性。結(jié)果表明，江蘇某奶

9、牛場畜群中家畜衣原體ompA基因的全序列具有高度的多態(tài)性，檢測到7個共6種不同的序列;不同的是，家禽衣原體和鸚鵡熱衣原體的ompA基因序列保守，其序列和從揚州家禽中檢測到的這兩種衣原體的序列一致。
　　綜上所述，通過本研究建立的高度特異、敏感的FRET-qPCR方法對中國11個省的中國荷斯坦奶牛、肉牛的血液樣品以及江蘇某奶牛場奶牛的陰道拭子、糞便、牛奶和血液樣品進行檢測發(fā)現(xiàn)，衣原體的陽性率較高且檢測到家畜衣原體、鸚鵡熱衣原體、肺炎