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文檔簡介
1、狂犬病是一種人畜共患傳染病，死亡率極高，一旦發(fā)病100%死亡，對人民的生命安全造成了嚴重的威脅?？袢〔《臼且环N單鏈的不分節(jié)段的負股RNA病毒，共編碼5種結(jié)構(gòu)蛋白，其中L蛋白為狂犬病病毒中最大的一個結(jié)構(gòu)蛋白，負責(zé)病毒基因組的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及翻譯后的加工。L蛋白是高度保守的蛋白，突變會嚴重影響它的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程。因此，對L蛋白結(jié)構(gòu)和功能的研究探索顯得尤為重要。
本文通過RT-PCR方法擴增了L蛋白的聚合酶活性部位基因片段，并將
2、其克隆至pMD18-T載體中，再亞克隆進原核表達載體pET-32a(+)上，構(gòu)建重組原核表達質(zhì)粒pET-L。轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta(DE3)中用IPTG進行誘導(dǎo)表達，利用融合的His標簽，通過Western blot方法對表達產(chǎn)物進行檢測，證實為L重組融合蛋白。通過SDS-PAGE分析，表明L蛋白以包涵體形式進行表達，通過5 Mol尿素洗滌得到純度較高的重組蛋白，用逐步透析法進行蛋白質(zhì)重折疊。將純化復(fù)性后的重組蛋白與弗氏完全佐劑乳化
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