萊茵衣藻纖毛內(nèi)蛋白IFT139的原核表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備.pdf

1、IFT139是萊茵衣藻纖毛內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍譏FT復(fù)合物A中的一個(gè)重要組份。ift139在大腸桿菌中的表達(dá)、蛋白純化及多克隆抗體的制備，對(duì)于今后研究IFT139在纖毛中的特殊作用及IFT139與其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白的相互作用奠定了重要基礎(chǔ)，也對(duì)于纖毛病進(jìn)一步的研究進(jìn)展提供了有利的依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)(1)以pBlu-ift139質(zhì)粒為模板，通過(guò)PCR方法獲得兩端帶有相應(yīng)酶切位點(diǎn)的ifi139目的片段，并成功構(gòu)建pGEX-2T-ifi139、pM

2、AL-c2-ift139與pET-28a(+)-ift139三個(gè)重組質(zhì)粒。(2)將三種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到BL21，進(jìn)行IPTG（濃度為0.2 mmol/L）的誘導(dǎo)表達(dá)，GST-139、MBP-139及HIS-139三種融合蛋白在誘導(dǎo)后均有所表達(dá)，帶有MBP標(biāo)簽的蛋白表達(dá)大部分分布于上清，GST標(biāo)簽的融合蛋白在上清和沉淀中均有分布，但表達(dá)量較低，HIS標(biāo)簽的融合蛋白均以沉淀的形式存在，最后選擇經(jīng)過(guò)親和層析純化后的MBP-IFT139融合蛋白作