重組IBDV Vp2蛋白的制備與免疫保護(hù)試驗(yàn).pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩61頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是引起我國(guó)及世界養(yǎng)禽業(yè)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重的主要傳染病之一。目前,使用的常規(guī)弱毒疫苗和滅活疫苗的安全性和制造工藝存在缺陷,而為預(yù)防變異毒株采用的中強(qiáng)毒力活疫苗存在著較大的生物安全問(wèn)題。因此,在當(dāng)前IBD防控工作中,亟需免疫效力強(qiáng)、生物安全性高,并且針對(duì)當(dāng)前流行毒株的新型IBD基因工程疫苗的問(wèn)世。本試驗(yàn)內(nèi)容包括兩個(gè)部分:
   試驗(yàn)1:重組IBDV Vp2蛋白的制

2、備
   將本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的高效表達(dá)IBDV Vp2的重組桿狀病毒vBacA-Vp2(P3代)接種Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞,用間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)檢測(cè),出現(xiàn)特異性熒光;用IBDV抗體夾心ELISA檢測(cè),呈陽(yáng)性反應(yīng);用Western-blotting分析,在53 ku處有一條特異蛋白條帶;電鏡觀察,重組Vp2蛋白能組裝成病毒樣顆粒。優(yōu)化重組Vp2蛋白的表達(dá)條件,在感染前一天預(yù)鋪Sf9細(xì)胞,待細(xì)胞密度達(dá)90%時(shí),接種不同接毒量的vBa

3、cA-Vp2,分別于72、96和120 h收集細(xì)胞培養(yǎng)物,用IBDV雙抗體夾心ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)物效價(jià)。結(jié)果表明接種vBacA-Vp2的接毒量為0.01,表達(dá)時(shí)間為72 h,收集的細(xì)胞培養(yǎng)物中重組Vp2蛋白含量最高,抗原效價(jià)達(dá)3.2×103。用優(yōu)化的重組Vp2蛋白表達(dá)條件,接種vBacA-Vp2,收集細(xì)胞培養(yǎng)物,大量制備重組Vp2蛋白,為研制新型高效IBD病毒樣顆?;蚬こ桃呙缰苽淇乖?。
   試驗(yàn)2:重組IBDV Vp2蛋

4、白的免疫保護(hù)試驗(yàn)
   將重組桿狀病毒vBacA-Vp2感染的昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解物分別與ISA206、ISA50和白油三種佐劑乳化制成抗原,免疫2周齡SPF雞,一次免疫14 d后,ELISA方法檢測(cè)抗體效價(jià),結(jié)果ISA206和IBDV B87株免疫組之間無(wú)顯著差異(P>0.05),但均顯著高于其他組(ISA50、白油和空白對(duì)照組)(P<0.01),細(xì)胞中和試驗(yàn)測(cè)定,ISA206組中和抗體效價(jià)顯著高于其它4組(B87、ISA50、白油和

5、空白對(duì)照組)(P<0.01);二次免疫14 d后,ELISA方法檢測(cè)抗體效價(jià),結(jié)果ISA206組顯著高于其他組(B87、ISA50、白油和空白對(duì)照組)(P<0.01),而白油、ISA50和B87株免疫組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05),細(xì)胞中和試驗(yàn)測(cè)定,ISA206組中和抗體效價(jià)顯著高于其它4組(B87、ISA50、白油和空白對(duì)照組)(P<0.01);用IBDV AH1強(qiáng)毒株對(duì)各免疫保護(hù)組進(jìn)行攻毒試驗(yàn),ISA206、白油和B87株免疫

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論