馬鈴薯晚疫病菌的長(zhǎng)期保存與特異性SCAR標(biāo)記的開(kāi)發(fā).pdf

1、馬鈴薯是世界上繼水稻、小麥和玉米之后的第四大糧食作物。2008年被聯(lián)合國(guó)宣布為“國(guó)際馬鈴薯年”(IYP)更突顯出馬鈴薯在全球糧食系統(tǒng)中的重要地位，我國(guó)馬鈴薯的種植面積與產(chǎn)量均居世界首位，但是由卵菌門(mén)致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont.)de Bary]引起的馬鈴薯晚疫病一直威脅著我國(guó)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
　　 由于馬鈴薯晚疫病菌的腐生能力弱，在干燥、過(guò)高或過(guò)低的溫度條件下很容易死去，所以很難利用其他病

2、原真菌的長(zhǎng)期保存法來(lái)保存晚疫病菌。本研究利用礦物油對(duì)2006～2008年采自吉林省和黑龍江省的73株馬鈴薯晚疫病菌進(jìn)行保存，測(cè)定了在不同保存時(shí)期的馬鈴薯晚疫病菌的生存力。結(jié)果表明在礦物油中保存的所有馬鈴薯晚疫病菌中，94.6％的菌株生存。實(shí)際上，在礦物油中保存4、5、6、10、12、13和15個(gè)月后菌株的生存率是100%；保存7個(gè)月后菌株的生存率是80%；保存8個(gè)月后菌株的生存率是90.5%；保存9個(gè)月后菌株的生存率是91.7%；保存1

3、1個(gè)月后菌株的生存率是88.9%；保存14個(gè)月后菌株的生存率是75%。本試驗(yàn)采用離體接種的方法測(cè)定了不同保存時(shí)期馬鈴薯晚疫病菌的致病性，計(jì)算了礦物油保存后生存菌株的復(fù)合寄生適合度。結(jié)果表明，平均病斑面積是8.68 cm2，平均侵染率是1.0，平均產(chǎn)孢能力是5031個(gè)孢子囊/cm2，平均復(fù)合寄生適合度是40926。在礦物油中保存的馬鈴薯晚疫病菌的致病性分布在14806～414474個(gè)孢子囊/cm2。因此，礦物油保存方法能夠適用于馬鈴薯晚疫

4、病菌的長(zhǎng)期保存。
　　 潛伏于馬鈴薯薯塊中的晚疫病菌是來(lái)年晚疫病發(fā)生的最主要初侵染源，馬鈴薯晚疫病在植株上發(fā)病初期很難鑒定，本研究根據(jù)已報(bào)道的晚疫病菌基因序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物L(fēng)B-3F/LB-3R，并利用此引物擴(kuò)增從晚疫病菌和其他常見(jiàn)致病菌(大豆疫霉菌、馬鈴薯早疫病菌、腐霉菌、鐮刀菌、灰霉菌、立枯絲核菌)中提取的基因組DNA。擴(kuò)增結(jié)果顯示在所擴(kuò)增的馬鈴薯晚疫病菌中發(fā)現(xiàn)了大約150 bp特異性DNA片段，而其他菌株均未擴(kuò)增出目

5、的條帶。將此特異性片段克隆、測(cè)序并與已公布的P.infestans A1交配型菌株的特異片斷(573 bp)進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示本試驗(yàn)插入的馬鈴薯晚疫病菌特異性片段大小為156 bp，測(cè)定基因序列與P.infestans A1交配型菌株的特異片斷(573 bp)的中間段基因序列(259 bp～414 bp)之間有99%的相似性。本試驗(yàn)利用從特異性片段中收回基因組DNA合成探針，并利用此探針對(duì)馬鈴薯晚疫病菌及其他致病菌基因組DNA進(jìn)行Sou

6、thern雜交驗(yàn)證，結(jié)果只有晚疫病菌雜交出片段，其他菌株均無(wú)，這與PCR擴(kuò)增結(jié)果一致。
　　 為了鑒定不同潛伏期馬鈴薯晚疫病的存在，本試驗(yàn)利用該特異性引物分別擴(kuò)增從不同接種時(shí)期(0、4、8、12、24、48、72、96、120 h)馬鈴薯葉片、莖、薯塊上提取的基因組DNA。結(jié)果顯示，在葉片上接種4h之后提取的基因組DNA中擴(kuò)增出目的條帶，在莖上接種48 h之后基因組DNA中擴(kuò)增出了目的條帶，在薯塊上接種24 h之后提取的基因組D