小麥光腥黑粉菌（Tilletia foetida）AFLP分析及其種的特異性SCAR標(biāo)記的發(fā)掘.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜绺鲊?guó)主要糧食作物之一，是我國(guó)第二大糧食作物。小麥光腥黑穗病(commonbuntofwheat)是小麥生產(chǎn)上的一種毀滅性病害。該病發(fā)生歷史久遠(yuǎn)，分布廣泛，流行性強(qiáng)，危害嚴(yán)重。傳統(tǒng)的病害診斷、檢測(cè)方法主要是依據(jù)病原形態(tài)學(xué)、生理學(xué)和病害癥狀特性，不但過(guò)程繁瑣、時(shí)間周期長(zhǎng)，而且準(zhǔn)確性差、精度不高。因此，研究開發(fā)快速、準(zhǔn)確的病害分子診斷、檢測(cè)技術(shù)，對(duì)于防止該病害的傳播和蔓延，確保我國(guó)小麥安全生產(chǎn)具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值?！　”卷?xiàng)

2、研究從美國(guó)及國(guó)內(nèi)收集了小麥光腥黑粉菌5個(gè)菌株、小麥網(wǎng)腥黑粉菌3個(gè)菌株和小麥矮腥黑粉菌、玉米絲黑穗菌、小麥散黑穗菌等小麥光腥黑粉菌部分近緣種的冬孢子標(biāo)樣，分析比較了改良CTAB法、氯化芐法和SDS法從病原物冬孢子中提取基因組DNA，通過(guò)比較，最終建立了黑粉菌冬孢子總DNA提取的SDS法，該方法可以從病原菌微量冬孢子中成功提取基因組DNA?！　”驹囼?yàn)采用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，通過(guò)對(duì)各種供試黑粉菌菌株的基因組DNA進(jìn)行酶切、連接、預(yù)擴(kuò)增、選

3、擇性擴(kuò)增和銀染檢測(cè)，共篩選了132對(duì)AFLP引物組合，獲得了其中一對(duì)引物組合(M09/E04)，可擴(kuò)增出小麥光腥黑粉病菌種的特異性條帶。經(jīng)多次重復(fù)驗(yàn)證表明：該引物組合對(duì)所有供試的小麥光腥黑粉病菌5個(gè)菌株均可擴(kuò)增出特異性DNA片段，而在小麥網(wǎng)腥黑粉病菌、小麥矮腥黑粉病菌、玉米絲黑穗病菌和小麥散黑穗病菌等近緣種中，則未擴(kuò)增出該DNA片段。通過(guò)對(duì)該目的片斷的回收、純化、克隆和序列測(cè)定，表明該特異性DNA片段大小為286bp。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為小麥光