硫酸頭孢喹肟注射液的研制及其初步應(yīng)用.pdf

1、硫酸頭孢喹肟(Cefquinome Sulfate)由德國赫斯特公司(Hoechst AG)于二十世紀八十年代初開發(fā)的第四代動物專用頭孢類抗生素,并于1993年首次批準上市。硫酸頭孢喹肟具有抗菌譜廣、抗菌活性強、藥代動力學特征優(yōu)良及毒副作用低等優(yōu)點,已在歐洲、南美洲等開始用于獸醫(yī)臨床防治豬和牛的細菌感染性疾病。本項目依據(jù)《中華人民共和國獸藥典》一部附錄對“混懸型注射液”的規(guī)定,研制了硫酸頭孢喹肟混懸注射液,并通過對該制劑的質(zhì)量控制及穩(wěn)定

2、性、生物等效性、臨床應(yīng)用、殘留消除規(guī)律等方面的研究,以期獲得一種能和進口頭孢喹肟具有同等生物效應(yīng)的注射液,并最終能在我國獸醫(yī)臨床推廣使用。
　　 1、硫酸頭孢喹肟注射液的研制
　　 根據(jù)硫酸頭孢喹肟的理化性質(zhì),進行了硫酸頭孢喹肟注射液(2.5％)處方篩選和制劑生產(chǎn)工藝的研究。確定了制備硫酸頭孢喹肟注射液時所用原料藥的超微粉碎粒度、注射級大豆油溶媒及無菌充氮條件下混懸制備優(yōu)化工藝;通過溫度、光照對該混懸注射液的穩(wěn)定性影響試

3、驗,建立了該制劑無菌制備工藝技術(shù)和20℃以下避光保存的貯藏條件。
　　 2、質(zhì)量考察及穩(wěn)定性、肌注刺激性試驗
　　 通過性狀監(jiān)測、光照試驗、分散性試驗、沉降試驗,判定硫酸頭孢喹肟注射液為微細顆粒的混懸油溶液,久置分層,振搖后成均勻的類白色至淡黃色混懸液;經(jīng)紫外-可見分光光度法掃描確定,頭孢喹肟在265nm±2nm的波長處有最大吸收。根據(jù)頭孢喹肟在堿性條件下與羥胺作用生成的羥肟酸,在稀酸中能與高鐵離子發(fā)生顯色反應(yīng)、硫酸鹽與

4、氯化鋇試液能生成白色硫酸鋇沉淀,以及液相色譜法測定供試品溶液主峰的保留時間(tR)與對照品溶液主峰的保留時間(tR)等,建立了硫酸頭孢喹肟注射液可用顯色法、沉淀反應(yīng)和液相色譜法進行鑒別。
　　 建立了硫酸頭孢喹肟注射液中硫酸頭孢喹肟含量測定的高效液相色譜法(HPLC)。色譜條件:色譜柱為Alltech alltima C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),柱溫25℃,流動相為高氯酸鈉-磷酸-乙腈(500:6:57,pH3

5、.5±0.1),流速為1.0mL/min,紫外檢測波長為269 nm,進樣量20μL。結(jié)果顯示硫酸頭孢喹肟在11.78～235.6μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998),平均回收率為99.70％,RSD為0.435％。
　　 將三批硫酸頭孢喹肟注射液,分別進行加速和長期穩(wěn)定性試驗,通過測定外觀性狀、分解產(chǎn)物和含量等各項指標,與0時進行比較。結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟注射液在40±2℃條件下放置6個月時,外觀色澤加深;液相檢

6、查,總雜質(zhì)均已超過4％,在30±2℃條件下放置6個月時,外觀色澤稍加深;液相檢查,2,3-環(huán)已基吡啶峰、其他單個最大峰、總雜質(zhì)峰均未超標,含量也在合格范圍,在涼暗處貯存18個月后,有關(guān)物質(zhì)逐漸增加,但仍未超過標準規(guī)定的限度。
　　 試驗選用4只健康家兔,分兩組進行刺激性試驗。第一組2只家兔在四頭肌處肌注頭孢喹肟混懸注射液后48小時內(nèi),食欲與飲欲稍有下降,四肢外觀無明顯變化,剖檢發(fā)現(xiàn)股四頭肌為輕度出血,且有散在出血點,但無肌肉變性

7、現(xiàn)象;第二組2只家兔注射后7天內(nèi),食欲與飲欲無明顯下降,四肢外觀無明顯變化,7天后解剖檢查表明,股四頭肌基本不出血,無肌肉變性現(xiàn)象。試驗表明供試品的局部試驗對動物肌肉的刺激性較弱。
　　 3、在豬體內(nèi)藥代動力學生物等效性試驗及殘留消除試驗
　　 試驗對所研制的硫酸頭孢喹肟注射液(2.5％)進行了豬體內(nèi)藥代動力學生物等效性試驗,藥代動力學過程表現(xiàn)為二室開放模型。與參照組比較,受試組吸收較慢,達峰時間較長,消除較緩慢。受試組

8、AUC90％置信區(qū)間為104.1％-120.0％,在參照組均值的80％-120％范圍內(nèi);Cmax90％置信區(qū)間為99.6％-116.7％,在參照組均值的70％-130％范圍內(nèi)。表明受試品和參照品個體間、周期間和劑型間符合生物等效性的統(tǒng)計學要求,為生物等效制劑。
　　 建立了豬組織中頭孢喹肟的固相萃取.高效液相色譜(SPE-HPLC)測定方法,并對硫酸頭孢喹肟注射液在豬體內(nèi)的殘留消除規(guī)律進行了研究。組織樣品中頭孢喹肟殘留采用磷酸鹽

9、緩沖液和乙腈提取,C18固相萃取小柱凈化,磷酸鹽緩沖液淋洗、乙腈溶液洗脫。頭孢喹肟含量采用高效液相色譜紫外檢測器檢測,外標法定量。測定方法的LOD(檢測限)和LOQ(定量限)分別為5～30 ng/g和20～100 ng/g。在0.02～2.0μg/g添加范圍內(nèi),平均回收率55.7％～79.4％,變異系數(shù)低于6.7％。建立的豬組織中頭孢喹肟殘留測定的技術(shù)參數(shù)能滿足豬組織中頭孢喹肟殘留測定要求。
　　 健康豬按2mg/kg劑量肌肉注

10、射2.5％頭孢喹肟注射液,每日1次,連續(xù)5 d,最后一次給藥后0.5、1、2、3、5、7、9 d分別宰殺5頭豬,采集肌肉、脂肪、肝臟和腎臟,測定組織中頭孢喹肟殘留量。頭孢喹肟主要殘留于豬的腎臟和肝臟,脂肪和肌肉中殘留較少,提示腎臟和肝臟為頭孢喹肟在豬體內(nèi)殘留的靶組織。停藥3d后,所有組織中藥物殘留量均低于EMEA規(guī)定最高殘留限量(MRLs)。研究結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟在豬組織中消除迅速。建議休藥期為3 d。
　　 4、治療奶牛大

11、腸桿菌性乳房炎試驗及在泌乳奶牛的牛奶中殘留消除試驗
　　 試驗選取了24頭大腸桿菌性顯性乳房炎病牛,一組肌肉注射頭孢喹肟混懸注射劑作治療試驗組,另一組肌肉注射氨芐西林鈉作藥物對照組,結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟混懸注射劑與注射用氨芐西林鈉對奶牛大腸桿菌性乳房炎均有較好的治療效果,在控制病程和產(chǎn)奶量方面頭孢喹肟混懸注射劑明顯優(yōu)于注射用氨芐西林鈉,肌肉注射硫酸頭孢喹肟混懸注射劑1 mg/kg.bw,其臨床治愈率可達90％以上,細菌學治愈率

12、可達80％以上。
　　 建立了頭孢喹肟在牛奶中殘留的高效液相色譜檢測方法。牛奶中頭孢喹肟殘留采用乙腈提取,提取液旋轉(zhuǎn)蒸干,殘留物用流動相復(fù)溶,進行高效液相色譜測定。流動相為醋酸.醋酸鈉緩沖液:甲醇(83:17,v/v),紫外檢測波長為270nm。檢測結(jié)果表明,頭孢喹肟在0.02～2μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性相關(guān)(R2≥0.9997)。在0.02μg/mL、1μg/mL、2μg/mL的添加水平上,頭孢喹肟在牛奶中的平均回收率為8

13、5.28％～98.56％,日內(nèi)和日間變異系數(shù)分別為1.55％～4.36％、0.40％～2.01％,最低檢出限為0.01μg/mL,定量限為0.02μg/mL。
　　 試驗選擇4頭處于泌乳期的健康荷斯坦奶牛,試驗前未使用過頭孢喹肟。硫酸頭孢喹肟混懸劑按推薦劑量于奶牛頸部肌內(nèi)注射,1次/d,連用2日。停藥后按預(yù)定時間點(0.5、12、24、36、48、60、72、84、96、108h)采集奶樣。利用建立的牛奶中頭孢喹肟殘留檢測高效液