版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、血紅素加氧酶(heine oxygenase,HO,EC1.14.99.3)催化降解血紅素(heme),生成膽綠素( biliverdin,BV),一氧化碳(carbon monoxide,CO)和亞鐵離子(ferrous iron,Fe2+).動物中大量研究表明,HO具有抗炎癥、抗氧化、抗凋亡、調(diào)節(jié)微循環(huán)等生物活性,在許多生理和病理過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用.近年來的研究發(fā)現(xiàn),植物體HO除了參與合成光敏色素發(fā)色團(tuán)所必需及響應(yīng)光周期變化外
2、,還具有諸如參與氣孔關(guān)閉進(jìn)程、誘導(dǎo)側(cè)根和不定根發(fā)生、緩解脅迫導(dǎo)致的氧化傷害等功能.
本研究以水稻(Oryza sativa L.)為材料,根據(jù)先前報(bào)道的SE5基因(血紅素加氧酶l,OsH01)序列,通過設(shè)計(jì)引物,克隆了SE5基因的CDS區(qū)序列,其開放閱讀框長為870 bp,編碼289個氨基酸殘基的多肽。多序列比對結(jié)果表明,OsHO1舍有結(jié)合heine的His位點(diǎn),且具有血紅素加氧酶1的保守特征序列,并與植物其他HO1蛋白一
3、樣,具有高度的保守性;通過預(yù)測其蛋白序列的信號肽切割位點(diǎn),通過構(gòu)建水稻成熟HO蛋白基因的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中成功表達(dá)了融合6×His的成熟HO1(His-mOsHO1)蛋白,經(jīng)金屬離子親和純化,得到純度較高的融合蛋白.通過酶活性測定,發(fā)現(xiàn)其具有催化heme降解并產(chǎn)生BV的特征峰;通過進(jìn)一步對其生化特性的研究表明:His-mOsHO1酶反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)Vmax為63.3 nmol BV IXa h-1 mg-1protein; Km值
4、為2.9μM hemin;最適pH值為7.0;最適溫度在一定范圍(10-45℃)內(nèi)呈遞增的趨勢。此外,通過構(gòu)建融合了OsHO1導(dǎo)肽基因序列的綠色熒光蛋白(GFP)基因載體,并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)煙草葉片表皮的瞬時表達(dá),結(jié)果表明OsHO1至少定位在葉綠體中。
將純化得到的His-mOsHO1制備抗體,并通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證抗體的特異性。同時,結(jié)合RT-PCR,研究了SE5基因在水稻不同部位的組織分布特性。結(jié)果表明:OsHO1基因在水稻莖、葉
5、子和萌發(fā)的種子中的表達(dá)量要明顯高于根和胚芽;Western blot的結(jié)果證實(shí),OsHO1蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)出與RT-PCR相一致的結(jié)果。采用非生物脅迫(NaCl和PEG)處理水稻幼苗后發(fā)現(xiàn),OsHO1基因的表達(dá)可以受脅迫誘導(dǎo),并隨處理時間呈現(xiàn)出一定的遞增趨勢,且處理后根和葉片的誘導(dǎo)具有一定的相似性。這些結(jié)果暗示,SE5基因可能是受脅迫誘導(dǎo)的基因,并可能在脅迫中起到一定的作用.
構(gòu)建SE5基因的RNAi過表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介
6、導(dǎo)的水稻愈傷轉(zhuǎn)化及擬南芥花序侵染,分別篩選得到了過表達(dá).SE5基因的轉(zhuǎn)基因水稻和擬南芥,并通過PCR驗(yàn)證陽性轉(zhuǎn)基因植株。初步的生理學(xué)試驗(yàn)表明,過表達(dá)SE5基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥可以緩解百草枯處理引起的種子萌發(fā)抑制及氧化傷害.
利用HO催化底物血紅素的基團(tuán)取代物heroin和hematin(氯化血紅素和羥鐵血紅素)預(yù)處理或者共處理鹽脅迫下小麥和水稻種子,發(fā)現(xiàn)兩者均可以不同程度地緩解鹽脅迫導(dǎo)致的種子萌發(fā)抑制(包括發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)
7、芽指數(shù)).進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),hemin和hematin緩解鹽脅迫下種子萌發(fā)的抑制可能與其提高種子中淀粉酶活性、還原糖和可溶性總糖、相關(guān)抗氧化酶轉(zhuǎn)錄本及活性有關(guān);當(dāng)采用CO清除劑Hb、HO酶活性抑制劑ZnPP時,heroin和hematin的緩解效應(yīng)則被不同程度地逆轉(zhuǎn),暗示hemin和hematin可能通過誘導(dǎo)HO催化產(chǎn)生的CO起作用;此外,一氧化氮(nitric oxide,NO)清除劑亞甲基藍(lán)(methylene blue,MB)處理
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 血紅素誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞合成血紅素加氧酶-1的抗炎機(jī)制.pdf
- 血紅素和西羅血紅素分支合成關(guān)鍵酶的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf
- 氯化血紅素誘導(dǎo)的血紅素加氧酶-1在膿毒癥小鼠骨骼肌萎縮中的作用.pdf
- 血紅素加氧酶1與脂聯(lián)素關(guān)系的研究.pdf
- 鐵和血紅素代謝
- 利用豬血制備氯化血紅素及分析.pdf
- 2265.corynebacteriumglutamicum血紅素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺失對血紅素代謝調(diào)控的影響
- 9692.松江鱸(trachidermusfasciatus)兩種血紅素加氧酶基因的克隆、表達(dá)與功能分析
- 氯化血紅素項(xiàng)目商業(yè)計(jì)劃書
- 日本血吸蟲血紅素加氧酶系的研究.pdf
- 血紅素加氧酶與氧驚厥關(guān)系的研究.pdf
- 肥頭鰷血紅素加氧酶-1(HO-1)基因的克隆與表達(dá)研究.pdf
- 利用豬血制備氯化血紅素技術(shù)的研究.pdf
- 乙烯信號與血紅素-血紅素加氧酶系統(tǒng)在抑制番茄黃化幼苗主根伸長中的互作.pdf
- 氯化血紅素項(xiàng)目商業(yè)計(jì)劃書88796
- 血紅素蛋白質(zhì)、血紅素及原卟啉IX的電化學(xué)行為研究.pdf
- 血紅素加氧酶-1對人氣道黏液高分泌的影響.pdf
- 利用馬血制備氯化血紅素技術(shù)的研究.pdf
- 磁性碳納米管固定羥高鐵血紅素仿生催化苯胺的研究.pdf
- 牛血紅素heme酶聯(lián)免疫分析
評論
0/150
提交評論