大菱鲆性腺分化組織學(xué)和早期性別快速鑒定技術(shù)的研究.pdf

1、大菱鲆是當(dāng)前世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高、經(jīng)濟(jì)規(guī)模最大的海水魚(yú)類(lèi)之一,在我國(guó)是重要的海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)。本論文以工廠化養(yǎng)殖的大菱鲆魚(yú)苗為研究對(duì)象,運(yùn)用組織學(xué)觀察手段,對(duì)大菱鲆原始性腺的發(fā)育和精巢卵巢性分化的過(guò)程進(jìn)行了深入研究和分析,同時(shí)探索建立了大菱鲆早期性別快速檢測(cè)鑒定技術(shù),所得結(jié)果結(jié)論如下:
　　 1.大菱鲆早期原始性腺發(fā)育的組織學(xué)觀察
　　 組織學(xué)連續(xù)切片,H.E.染色,初孵仔魚(yú)至40日齡,全長(zhǎng)2.5mm-32.2mm,在顯微鏡下

2、觀察:大菱鲆的原始生殖細(xì)胞(primordial germ cell,PGC)在形成后,經(jīng)過(guò)遷移,轉(zhuǎn)移到位于腹腔壁上的生殖嵴中,10日齡仔魚(yú),全長(zhǎng)6.14mm,觀察到PGC已經(jīng)遷入到位于腎管下方和腸管之間體腔膜上的生殖嵴中,此時(shí)觀察到的PGC胞徑約為5.1μm～6.5μm,核徑約為2.4μm～3.3μm;15日齡時(shí),全長(zhǎng)8.41mm,觀察到原始性腺一端固定在腎臟下方的體腔膜上,其中有多個(gè)PGC的存在;20日齡,全長(zhǎng)14.55mm,仔魚(yú)已

3、經(jīng)偏轉(zhuǎn)變態(tài),原始性腺兩端都固定在體腔膜上;25日齡,17.76mm,原始性腺開(kāi)始慢慢遠(yuǎn)離腎臟,逐步向體腔下緣移動(dòng),從靠近腎臟的體腔膜上游離出來(lái),另一端固定在體腔下緣的體膜上;30日齡,全長(zhǎng)24.21mm,原始性腺已經(jīng)轉(zhuǎn)移到腹腔下緣,與腎臟之間距離繼續(xù)擴(kuò)大;40日齡,平均全長(zhǎng)32.2mm,此時(shí)原始性腺已經(jīng)完全轉(zhuǎn)移到體腔底部,遠(yuǎn)離腎臟,一端固定于腹腔底部的腹腔膜上,另一端游離在腹腔中發(fā)育。性腺中未發(fā)現(xiàn)明顯的性分化特征。
　　 2.大

4、菱鲆卵巢分化的組織學(xué)觀察
　　 大菱鲆經(jīng)過(guò)原始性腺時(shí)期后進(jìn)入性分化階段。卵原細(xì)胞經(jīng)有絲分裂增殖形成卵原細(xì)胞簇是卵巢分化的細(xì)胞學(xué)證據(jù),卵巢腔的形成則是大菱鲆卵巢分化的解剖學(xué)證據(jù)。大菱鲆幼魚(yú)在全長(zhǎng)35.2mm時(shí),性腺中開(kāi)始出現(xiàn)成簇的PGCs群,同時(shí)靠近腹腔壁一側(cè)與腹腔壁體細(xì)胞融合圍成一個(gè)空腔,這是向著卵巢分化的最初標(biāo)志;到全長(zhǎng)40.3mm時(shí),卵巢中形成了卵巢腔;隨著性腺的不斷發(fā)育,卵巢腔不斷擴(kuò)大,卵巢形成,至全長(zhǎng)69.3mm時(shí),大菱

5、鲆卵巢開(kāi)始形成向尾部肌肉延伸的突起:全長(zhǎng)113.4mm時(shí),卵巢中觀察到Ⅰ時(shí)相卵母細(xì)胞,卵巢分化完成。
　　 3.大菱鲆精巢分化的組織學(xué)觀察
　　 大菱鲆精巢分化要晚于卵巢分化,與其他魚(yú)類(lèi)性別分化規(guī)律一致。從本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果看,大菱鲆幼魚(yú)在全長(zhǎng)47.6mm時(shí),出現(xiàn)了包裹數(shù)個(gè)精原細(xì)胞的囊狀結(jié)構(gòu)-精小囊;在全長(zhǎng)55.2mm時(shí),精小囊清晰可見(jiàn):全長(zhǎng)64.2mm時(shí),精原細(xì)胞小型化明顯,達(dá)到增殖末期,開(kāi)始向精母細(xì)胞轉(zhuǎn)化,在之后的發(fā)育過(guò)

6、程中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)特征變化直至分化完成。
　　 4.大菱鲆早期性別快速鑒定技術(shù)
　　 對(duì)于全長(zhǎng)9cm～15cm,體重10g～90g之間,肉眼無(wú)法區(qū)分雌雄的大菱鲆幼魚(yú)取其性腺,進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)鑒定,采用活體壓片,醋酸洋紅染色,鏡檢染色結(jié)果發(fā)現(xiàn):壓片染色結(jié)果差異性非常明顯,特別是卵巢,可觀察到大量的卵原細(xì)胞,卵原細(xì)胞體積大,十分清晰,特征明顯,精巢沒(méi)有明顯的結(jié)構(gòu)特征,顯微鏡下很容易區(qū)分鑒別出幼魚(yú)性別,建立了快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的