栽培花生基因組BAC文庫的構(gòu)建.pdf

1、栽培花生(Arachis hypogaea L.)是異源四倍體,含有A和B兩個基因組?，F(xiàn)有研究認(rèn)為四倍體栽培種是由二倍體種A.duranensis(A genome)和A.ipa(e)nsis(Bgenome)單一雜交后經(jīng)染色體自發(fā)加倍而成。單一雜交起源、多倍化引起的生殖隔離和少數(shù)育種親本的使用,使栽培花生基因組高度保守,遺傳多樣性非常有限,因此,利用遺傳作圖的方法分析基因十分困難?；ㄉ蚪MBAC文庫的構(gòu)建,對利用物理圖譜的方法來分析

2、花生基因組有很大的價值,可從該文庫中調(diào)取大量有用的基因,在利用基因工程技術(shù)改良作物品種性狀、開展分子育種等方面發(fā)揮重要作用。
　　 本實驗以栽培花生中花8號植株葉片為材料,參照已報道的BAC文庫構(gòu)建方法,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行技術(shù)改進(jìn),建立了一套適用于栽培花生品種的BAC文庫構(gòu)建技術(shù)體系。選取幼嫩的植物葉片,得到了濃度適宜,分子量大于1Mb的高分子量DNA瓊脂糖包埋塊兒,選擇合適的酶切條件回收到符合分子量要求的DNA大片段,通過建立高效

3、的連接體系,到目前為止共得到25,344個重組克隆。隨機(jī)挑取80個克隆經(jīng)小量堿裂解法提取質(zhì)粒酶切鑒定,脈沖凝膠電泳結(jié)果顯示,插入片段大小在30kb-150kb之間,平均插入片段大小為80kb,空載率為1.25％。隨機(jī)挑取3個BAC克隆做穩(wěn)定性繼代實驗,連續(xù)培養(yǎng)100代之后,BAC克隆依然穩(wěn)定,沒有重排現(xiàn)象。
　　 本實驗構(gòu)建的BAC文庫是我國迄今構(gòu)建的第一個栽培花生BAC文庫,盡管文庫覆蓋率到目前為止還不能滿足作圖和測序的需要,