乳酸環(huán)丙沙星溫度敏感型原位凝膠的初步研制.pdf

1、原位凝膠（in situ gel）是一種新型的藥物傳遞系統(tǒng)，在使用前是自由流動(dòng)的液體，當(dāng)環(huán)境條件變化時(shí)可迅速發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成半固體狀態(tài)凝膠，有利于局部給藥和延緩藥物釋放。溫敏型在體凝膠(thermosensitive in situ gel)是一種僅隨貯藏條件和用藥部位的溫度變化而發(fā)生相轉(zhuǎn)變的原位凝膠。本課題通過(guò)選取合宜的溫敏材料、模型藥物及溶媒制備了溫敏型原位凝膠，對(duì)該原位凝膠的膠凝溫度等特性進(jìn)行了研究，探討了溫敏型原位凝膠的溶蝕及藥

2、物釋放規(guī)律，考察了溫敏型原位凝膠的體外膠凝時(shí)間，肌肉刺激性及穩(wěn)定性。在國(guó)內(nèi)獸醫(yī)領(lǐng)域首次制備了乳酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacinlactate，CPFL)原位凝膠。具體內(nèi)容如下:
　　 ⑴溫敏型原位凝膠的溫敏材料及模型藥物篩選。選擇合宜的基質(zhì)并考察其水溶液膠凝特性。以給藥次數(shù)、半衰期短、抗菌譜、用途廣泛程度及良好的水溶性為指標(biāo)篩選出合宜的抗菌模型藥。結(jié)果表明:P407具有特殊的反向膠凝性質(zhì)，無(wú)毒，刺激性小，生物相容性好，具有

3、良好的流變學(xué)特征及緩釋作用而被選為溫敏材料。P407水溶液濃度接近或高于17.6％（g/mL）時(shí)，才具有膠凝能力;泊洛沙姆膠凝能力顯現(xiàn)出強(qiáng)烈的濃度依賴(lài)性。CPFL抗菌譜廣、應(yīng)用廣泛、半衰期短、給藥次數(shù)多及很好的水溶性而被最終選定為模型藥。泊洛沙姆溶液中能溶解高達(dá)20％（g/mL）的CPFL，可見(jiàn)，泊洛沙姆的載藥能力比較強(qiáng)，能滿(mǎn)足臨床需要。
　　 ⑵CPFL溫敏型原位凝膠的溶媒篩選。通過(guò)考察CPFL泊洛沙姆組合物在緩沖溶液中的穩(wěn)定

4、性，以探尋影響乳酸環(huán)丙沙星泊洛沙姆溶液穩(wěn)定性的因素和篩選最佳溶媒。乳酸、乳酸-乳酸鈉緩沖液及鹽酸控制的CPFL泊洛沙姆溶液在1周內(nèi)便析出沉淀。藥物濃度在10％時(shí)，醋酸-醋酸鈉緩沖液不能保證CPFL泊洛沙姆溶液的穩(wěn)定性;pH值3.6的醋酸-醋酸鈉緩沖液可保證8％ CPFL泊洛沙姆溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:CPFL在泊洛沙姆溶液中的穩(wěn)定性主要受pH值、pH調(diào)節(jié)劑、藥物濃度及溫度的影響;醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=3.6，0.2 mol/L)適合

5、作為CPFL泊洛沙姆組合物的溶媒，同時(shí)又兼保證CPFL(≤8％)在該體系中穩(wěn)定的穩(wěn)定劑。
　　 ⑶CPFL溫敏型原位凝膠的制備及特性研究。采用冷溶法制備原位凝膠溶液;采用試管倒轉(zhuǎn)法考察泊洛沙姆溶液膠凝溫度及輔料、主藥對(duì)其膠凝溫度的影響。以膠凝溫度為指標(biāo)篩選處方。試驗(yàn)結(jié)果表明:①P407濃度接近或高于18％(g/mL)時(shí)，才具有膠凝能力;泊洛沙姆膠凝能力顯現(xiàn)出強(qiáng)烈的濃度依賴(lài)性。②0.03％的依地二酸鈉(EDTA-2Na)作為該制劑

6、的金屬離子絡(luò)合劑，0.15％的亞硫酸氫鈉(NaHSO4)作為抗氧化劑，0.01％的苯扎溴銨為防腐劑。③EDTA-2Na及NaHSO4藥用輔料對(duì)膠凝溫度沒(méi)有明顯影響，苯扎溴銨可以略微提高膠凝溫度，CPFL可以明顯提高膠凝溫度。④初步優(yōu)選的處方及其膠凝溫度如下:24％P407+2％P188+8％ CPFL+0.03％ EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨，24％P407+3％ P188+8％ CPFL+0.03％

7、EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨及23％P407+1％ P188+8％ CPFL+0.03％EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨，對(duì)應(yīng)的膠凝溫度為32.5℃、33.5℃及31.4℃。因此，通過(guò)調(diào)節(jié)泊洛沙姆407和188的比例，可得到具有適宜膠凝溫度的原位凝膠。
　　 ⑷CPFL溫敏型原位凝膠的體外溶蝕及藥物釋放行為：①采用紫外分光光度法建立了釋放介質(zhì)中CPFL的含量測(cè)定方法

8、。方法的精密度、回收率、穩(wěn)定性均符合方法學(xué)的要求，CPFL在1.0～12.0μg·mL-1范圍內(nèi)濃度與吸光度間有良好的線(xiàn)性關(guān)系，處方輔料對(duì)CPFL的測(cè)定無(wú)干擾。②采用無(wú)膜溶出法和紫外分光光度法考察了原位凝膠的體外溶蝕和藥物釋放行為及其影響因素。不論釋放介質(zhì)是水還是生理鹽水，試驗(yàn)條件下優(yōu)化處方制備的CPFL原位凝膠體外的溶蝕行為及藥物釋放行為均遵循Higuchi平面擴(kuò)散模式動(dòng)力學(xué)方程。以緩釋時(shí)間為指標(biāo)篩選出了最佳CPFL原位凝膠處方即24

9、％ P407+2％P188+8％ CPFL+0.03％ EDTA·2Na+0.15％NaHSO4+0.01％苯扎溴銨。釋放面積增大，凝膠溶蝕及藥物釋放速率顯著增加;但振蕩頻率增大，凝膠的溶蝕及藥物釋放并沒(méi)有顯著的改變，它們的溶蝕及藥物釋放行為的相似性很高（f2均接近100）。③凝膠溶蝕與CPFL釋放的相關(guān)性考察試驗(yàn)表明溶蝕與擴(kuò)散是原位凝膠藥物釋放的兩種機(jī)制，且溶蝕是控制釋藥的主要因素。
　　 ⑸RP-HPLC法測(cè)定CPFL溫敏型

10、原位凝膠中主藥的含量。建立CPFL泊洛沙姆原位凝膠中CPFL含量測(cè)定的高效液相色譜法。根據(jù)光譜掃描的結(jié)果確定檢測(cè)波長(zhǎng)為279 nm。其他色譜條件為:Extreme C18柱(5μm，25 cm×4.6 mm)為色譜柱，流動(dòng)相為0.025 mol·L-1磷酸溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈(87∶13)，流速為1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量為50μL。乳酸環(huán)丙沙星檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為1.25～40μg·mL-1(r=1)，平均回收率9

11、9.55％(RSD=1.68％，n=9)。本法操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性較好，可用于測(cè)定CPFL原位凝膠中乳酸環(huán)丙沙星的含量。
　　 ⑹CPFL溫敏型原位凝膠體外膠凝時(shí)間測(cè)定及肌肉刺激性試驗(yàn)。以試管倒置法測(cè)定CPFL原位凝膠的膠凝時(shí)間;兔背側(cè)皮下注射原位凝膠觀察體內(nèi)膠凝情況;以無(wú)菌生理鹽水為對(duì)照，采用同體自身對(duì)照法評(píng)價(jià)CPFL泊洛沙姆原位凝膠對(duì)兔股四頭肌的刺激性。5批CPFL原位凝膠的膠凝時(shí)間為93～114秒;皮下注射

12、3～5min后，給藥部位可見(jiàn)凝膠。注射生理鹽水的四塊股四頭肌的反應(yīng)級(jí)總和為0，給藥四塊股四頭肌反應(yīng)級(jí)的總和為4(＜10)，且股四頭肌反應(yīng)級(jí)的最高與最低之差不大于2，符合肌肉刺激性規(guī)定?？梢?jiàn)，CPFL原位凝膠在動(dòng)物體溫下能迅速膠凝;CPFL原位凝膠可用于肌肉注射，但宜深部肌注。
　　 ⑺CPFL溫敏型原位凝膠的穩(wěn)定性初步研究?？疾霤PFL溫度敏感型原位凝膠制劑的穩(wěn)定性。CPFL泊洛沙姆原位凝膠在低溫、室溫、離心、高壓滅菌的條件下，