2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL,EC4.3.1.5),主要催化L一苯丙氨酸脫氨生成反式肉桂酸,為多種酚類及類黃酮終產物提供前體物質,是連接初級代謝和苯丙烷類次級代謝第一步反應的酶,也是關鍵酶和限速酶。通過這一途徑可以產生多種具有重要生理功能的次生代謝物質,如花色素、木質素、植保素等,這些物質在植物的生長發(fā)育、抗病、抗逆反應中起著重要的作用。
   本研究對大豆PAL基因(GmPAL

2、)進行克隆,并在此基礎上利用生物信息學手段對大豆PAL基因家族的兩個成員GmPAL1和GmPAL2推導出的蛋白質序列進行主要結構分析和功能預測,主要研究結果如下:
   1運用PCR擴增技術首次克隆了大豆苯丙氨酸解氨酶基因GmPAL2(GenBank accessionnumber:GQ358921)。測序結果表明,GmPAL2基因組DNA長度為4210bp,含有2個外顯子和1個內含子。與此同時克隆了已知的GmPAL1基因組DN

3、A,測序表明其長度為3658bp,和大多數(shù)PAL基因一樣包含兩個外顯子和一個內含子。
   2利用RT-PCR方法成功地從大豆中克隆了已知的苯丙氨酸解氨酶基因GmPAL1mRNA(GenBank accession number:X52953)和未知的GmPAL2 mRNA(GenBank accession number:GQ220305)。獲得的GmPAL1cDNA基因長度為2144bp,該基因可編碼712個氨基酸,其推導出

4、的氨基酸序列與其它植物PAL基因的具有較高的同源性。獲得的GmPAL2CDNA基因長度為2284b,該基因可編碼717個氨基酸,而且其推導出的氨基酸序列與其它植物PAL基因的也具有較高的同源性。
   3用ExPasy軟件包和TOPPRED在線分析GmPAL的理化特性,結果表明GmPAL1的理論等電點PI=6.14,蛋白質相對分子量Mw=77.715kDa:GmPAL2的理論等電點PI=5.83,蛋白質相對分子量Mw=78.11

5、6kDa。二級結構預測結果顯示,GmPAL1的α螺旋在49.09%左右,延伸鏈在7.11%左右,無規(guī)則卷曲在43.79左右;GmPAL2的α螺旋在48.46%左右,延伸鏈在6.46%左右,無規(guī)則卷曲在45.08左右,表明PAL為混合型蛋白。
   運用MEGA2.0軟件構建了GmPAL的系統(tǒng)進化樹,GmPAL和豌豆(Pisum sativum)、菜豆(Phaseolus vulgaris)的同源性很近。
   4運用在線

6、Motiff分析系統(tǒng),得知推測的PAL1氨基酸序列的194-210區(qū)域和PAL2氨基酸序列的199-215區(qū)域的GTITASGDLvPLSyiaG為PAL的活性位點,屬于植物PAL的特征序列,進一步驗證了所得序列均為PAL序列。
   啟動子(promoter)是RNA聚合酶能夠識別并與之結合,從而起始基因轉錄的序列,作為轉錄水平上一種重要的調控元件,研究啟動子,對我們了解生物的生長發(fā)育過程,探討生物對其生長環(huán)境的適應機制以及更

7、好地控制外源基因在轉基因植物中的表達等具有重要意義。
   本研究取得的主要結果如下:
   應用RAIL-PCR技術,克隆獲得了大豆PAL1和PAL2的上游啟動子區(qū),分別為2509bp和1384bp。對獲得的啟動子序列進行分析,發(fā)現(xiàn)了多個CART-box和TATA-box。TATA框具有將RNA聚合酶Ⅱ引導到正確的轉錄起始位點的功能,CART框主要控制著轉錄的起始頻率,是調控轉錄速率的元件,與啟動子的特異性無直接的關系

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