2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩81頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、L-苯丙氨酸(L-phenylalanine),作為人體必需的氨基酸之一,在食品工業(yè)中,主要用作新型食品添加劑阿斯巴甜(Aspartame,L-Asp-L-Phe-Me)的合成原料。隨著世界市場每年對阿斯巴甜需求量的增加,L-Phe的合成工藝已成為當前生物化工領(lǐng)域研究與開發(fā)的熱點。利用苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonia-lyase,PAL,E.C.4.3.1.5)的逆向催化特性來生產(chǎn)L-Phe是一條主要的路線,關(guān)鍵

2、問題在于怎樣低成本而又高效地獲得苯丙氨酸解氨酶PAL。本研究在畢赤酵母GS115和大腸桿菌BL21中構(gòu)建了PAL基因工程菌,期望通過微生物發(fā)酵實現(xiàn)苯丙氨酸解氨酶PAL的工業(yè)化生產(chǎn)。研究結(jié)果如下:
  1)克隆到了來自膜英黃芪和大豆的PAL基因的ORF。
  2)構(gòu)建了克隆載體pUCm-T-PAL并轉(zhuǎn)化到了大腸桿菌DH5α中。
  3)PAL基因的生物信息學分析結(jié)果。
  利用DNAStar軟件和NCBI對測序序列

3、進行分析,結(jié)果如下:來自于膜英黃芪的基因ORF長度為2157bp,編碼718個氨基酸,蛋白相對分子質(zhì)量為78KD,等電點為6.04,所擴增到的基因其核酸序列及氨基酸序列均與膜莢黃芪苯丙氨酸解氨酶EF567076.1有99%的一致性;來自于大豆的基因ORF長度為2142bp,編碼713個氨基酸,蛋白相對分子質(zhì)量為77.6KD,等電點為6.31,所擴增到的基因其核酸序列及氨基酸序列均與大豆苯丙氨酸解氨酶AK245610.1有100%的一致性

4、。
  4)利用體外同源重組技術(shù)構(gòu)建了表達載體pPIC9K-AmPAL, pPIC9K-GmPAL和pET32a-AmPAL。
  5)獲得了基因工程菌GS115-pPIC9K-AmPAL,GS115-pPIC9K-GmPAL和BL21-pET32a-AmPAL。
  基因工程菌誘導表達后,對其產(chǎn)物進行分析,結(jié)果如下:①重組菌BL21-pET32a-AmPAL與負對照相比,25℃時,1mmoL/L IPTG誘導1h后,

5、其SDS-PAGE電泳圖譜在96kD(包括載體上部分氨基酸序列)處有一條明顯的特異性蛋白條帶,大小與預期PAL蛋白一致,但是酶活性不高,只有5U;②重組菌GS115-pPIC9K-AmPAL,1%甲醇誘導48h后,其SDS-PAGE電泳圖譜在78KD位置處出現(xiàn)一條特異性條帶,其大小與預期值一致,并且隨著誘導時間增加,PAL表達量越來越大,誘導120h后,表達量達到最大。利用Q-Sepharose FF蛋白純化柱對總蛋白進行純化,獲得了較

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論