中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)腸道益生芽孢桿菌(Bacillus)的篩選、生長(zhǎng)特性及其應(yīng)用效果研究.pdf

1、目前水產(chǎn)養(yǎng)殖用益生菌制劑大多為陸源，篩選于水產(chǎn)動(dòng)物腸道的報(bào)道極少，有關(guān)中華絨螯蟹腸道益生菌的篩選、生長(zhǎng)特性及應(yīng)用研究則未見報(bào)道。
　　 根據(jù)菌體對(duì)高溫和低pH的耐受性、產(chǎn)酶能力及對(duì)病原菌的抑菌效果，對(duì)中華絨螯蟹腸道中的芽孢桿菌進(jìn)行了篩選。結(jié)果表明，在篩選到的3株芽孢桿菌中，ESB3菌株抑制中華絨螯蟹病原菌嗜水氣單胞菌CL99920菌株的能力最強(qiáng)，產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的能力也較好，在肉湯培養(yǎng)基初始pH3.0的條件下培養(yǎng)2h時(shí)，其存活率

2、為(33.98±5.51)％，90℃水浴處理10min存活率為(68.54±8.28)％；l×108CFU/mL以下濃度的ESB3對(duì)中華絨螯蟹無毒害作用，lxl07CFU/mL的ESB3能明顯提高中華絨螯蟹對(duì)嗜水氣單胞菌感染的抵抗力；經(jīng)形態(tài)學(xué)和生理生化反應(yīng)鑒定，ESB3為地衣芽孢桿菌。研究表明，ESB3菌株具有作為中華絨螯蟹益生菌的開發(fā)潛力。
　　 以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為初始培養(yǎng)基，探討了不同培養(yǎng)時(shí)間、初始pH值、溫度、鹽度(N

3、aCl濃度)、轉(zhuǎn)速、裝液量和接種量對(duì)中華絨螯蟹源地衣芽孢桿菌ESB3生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明:菌株ESB3產(chǎn)最大活菌數(shù)的培養(yǎng)條件為發(fā)酵時(shí)間20h，初始pH7.8，溫度為30℃，鹽度為1.5％(w/v)，轉(zhuǎn)速為190r/min，裝液量為30mL/250mL，接種量為9％。采用單因子試驗(yàn)和L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)化了種子培養(yǎng)基的組成，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)條件下的最佳種子培養(yǎng)基為:可溶性淀粉(2％)(w/v)、胰蛋白胨(2％)(w/v)、K2HP04(0

4、.3％)(w/v)，三種成份對(duì)ESB3菌株產(chǎn)活菌數(shù)影響力大小順序?yàn)镵2HP04、可溶性淀粉、胰蛋白胨。以上述最佳種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，ESB3菌株產(chǎn)活菌數(shù)達(dá)11.09×losCFU/mL。
　　 在基礎(chǔ)飼料中添加不同濃度(1.3×107CFU/g、1.4×108CFU/g、0.9×109CFU/g)的活的和1.4×108CFU/g濃度的滅活的地衣芽孢桿菌ESB3，飼喂中華絨螯蟹60d，考察了地衣芽孢桿菌ESB3對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)、腸道消

5、化酶活性、腸道菌群及免疫力的影響。結(jié)果顯示:活的ESB3菌株對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能和腸道消化酶活性有不同程度的促進(jìn)作用，其中中、低劑量活菌可顯著提高增重率(Weight gain rate)、腸道淀粉酶(Amylase)和蛋白酶活性(Protease)(P<0.05)，中劑量活菌好于低劑量活菌，但差異不顯著(P>0.05），高劑量活菌僅能顯著提高腸道淀粉酶活性（p＜0.05）?；罹瑯涌梢源龠M(jìn)中華絨螯蟹免疫力的提高，并且基本上隨著益生菌濃

6、度的提高，各項(xiàng)免疫指標(biāo)也隨之升高，其中高劑量活菌可顯著提高血細(xì)胞總數(shù)(THC)、血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性(02-)、酚氧化酶活性(P0)、溶菌酶活性(LSZ)、酸性磷酸酶活性(ACP)和堿性磷酸酶活性(ALP)(P<0.05)，對(duì)超氧化物歧化酶活性無顯著影響(P>0.05)。中劑量活菌可顯著提高血細(xì)胞總數(shù)、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性，對(duì)血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性、超氧化物歧化酶活性無顯著影響（P>0.05)。低劑量活菌僅可顯

7、著提高堿性磷酸酶的活性（P<0.05）。高劑量活菌組的血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和堿性磷酸酶活性均顯著高于中劑量組（P<0.05），血細(xì)胞總數(shù)、血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均顯著高于低劑量組（P<0.05）。活菌對(duì)好氧菌總數(shù)、厭氧菌總數(shù)和大腸桿菌數(shù)均無顯著影響，但可顯著提高芽孢桿菌數(shù)，顯著降低氣單胞菌數(shù)（戶<0.05），以高劑量活菌效果最好，三活菌組間無顯著差異(P>0.05）。滅活菌對(duì)