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文檔簡介
1、目前水產(chǎn)養(yǎng)殖用益生菌制劑大多為陸源,篩選于水產(chǎn)動物腸道的報道極少,有關(guān)中華絨螯蟹腸道益生菌的篩選、生長特性及應用研究則未見報道。
根據(jù)菌體對高溫和低pH的耐受性、產(chǎn)酶能力及對病原菌的抑菌效果,對中華絨螯蟹腸道中的芽孢桿菌進行了篩選。結(jié)果表明,在篩選到的3株芽孢桿菌中,ESB3菌株抑制中華絨螯蟹病原菌嗜水氣單胞菌CL99920菌株的能力最強,產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的能力也較好,在肉湯培養(yǎng)基初始pH3.0的條件下培養(yǎng)2h時,其存活率
2、為(33.98±5.51)%,90℃水浴處理10min存活率為(68.54±8.28)%;l×108CFU/mL以下濃度的ESB3對中華絨螯蟹無毒害作用,lxl07CFU/mL的ESB3能明顯提高中華絨螯蟹對嗜水氣單胞菌感染的抵抗力;經(jīng)形態(tài)學和生理生化反應鑒定,ESB3為地衣芽孢桿菌。研究表明,ESB3菌株具有作為中華絨螯蟹益生菌的開發(fā)潛力。
以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為初始培養(yǎng)基,探討了不同培養(yǎng)時間、初始pH值、溫度、鹽度(N
3、aCl濃度)、轉(zhuǎn)速、裝液量和接種量對中華絨螯蟹源地衣芽孢桿菌ESB3生長的影響,結(jié)果表明:菌株ESB3產(chǎn)最大活菌數(shù)的培養(yǎng)條件為發(fā)酵時間20h,初始pH7.8,溫度為30℃,鹽度為1.5%(w/v),轉(zhuǎn)速為190r/min,裝液量為30mL/250mL,接種量為9%。采用單因子試驗和L9(34)正交試驗優(yōu)化了種子培養(yǎng)基的組成,結(jié)果表明,實驗條件下的最佳種子培養(yǎng)基為:可溶性淀粉(2%)(w/v)、胰蛋白胨(2%)(w/v)、K2HP04(0
4、.3%)(w/v),三種成份對ESB3菌株產(chǎn)活菌數(shù)影響力大小順序為K2HP04、可溶性淀粉、胰蛋白胨。以上述最佳種子培養(yǎng)基培養(yǎng),ESB3菌株產(chǎn)活菌數(shù)達11.09×losCFU/mL。
在基礎飼料中添加不同濃度(1.3×107CFU/g、1.4×108CFU/g、0.9×109CFU/g)的活的和1.4×108CFU/g濃度的滅活的地衣芽孢桿菌ESB3,飼喂中華絨螯蟹60d,考察了地衣芽孢桿菌ESB3對中華絨螯蟹生長、腸道消
5、化酶活性、腸道菌群及免疫力的影響。結(jié)果顯示:活的ESB3菌株對中華絨螯蟹生長性能和腸道消化酶活性有不同程度的促進作用,其中中、低劑量活菌可顯著提高增重率(Weight gain rate)、腸道淀粉酶(Amylase)和蛋白酶活性(Protease)(P<0.05),中劑量活菌好于低劑量活菌,但差異不顯著(P>0.05),高劑量活菌僅能顯著提高腸道淀粉酶活性(p<0.05)?;罹瑯涌梢源龠M中華絨螯蟹免疫力的提高,并且基本上隨著益生菌濃
6、度的提高,各項免疫指標也隨之升高,其中高劑量活菌可顯著提高血細胞總數(shù)(THC)、血細胞呼吸爆發(fā)活性(02-)、酚氧化酶活性(P0)、溶菌酶活性(LSZ)、酸性磷酸酶活性(ACP)和堿性磷酸酶活性(ALP)(P<0.05),對超氧化物歧化酶活性無顯著影響(P>0.05)。中劑量活菌可顯著提高血細胞總數(shù)、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性,對血細胞呼吸爆發(fā)活性、超氧化物歧化酶活性無顯著影響(P>0.05)。低劑量活菌僅可顯
7、著提高堿性磷酸酶的活性(P<0.05)。高劑量活菌組的血細胞呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和堿性磷酸酶活性均顯著高于中劑量組(P<0.05),血細胞總數(shù)、血細胞呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均顯著高于低劑量組(P<0.05)?;罹鷮醚蹙倲?shù)、厭氧菌總數(shù)和大腸桿菌數(shù)均無顯著影響,但可顯著提高芽孢桿菌數(shù),顯著降低氣單胞菌數(shù)(戶<0.05),以高劑量活菌效果最好,三活菌組間無顯著差異(P>0.05)。滅活菌對
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