小黑楊葉片磷酸化蛋白質(zhì)組及類囊體膜蛋白復(fù)合體的鑒定與分析.pdf

1、森林植物是陸地生態(tài)系統(tǒng)的主體,是人類最主要的可持續(xù)利用資源,為更有效地利用林木資源并完成其可持續(xù)發(fā)展的過(guò)程,需要對(duì)生物體內(nèi)生理功能的執(zhí)行者——蛋白質(zhì)進(jìn)行深入細(xì)致的研究。但是對(duì)許多重要生理過(guò)程的調(diào)控不僅僅是通過(guò)改變蛋白質(zhì)種類及其表達(dá)豐度的就能完成的,更重要的是那些具有時(shí)空特異性分布的可逆翻譯后修飾。在眾多的翻譯后修飾中可逆的磷酸化修飾是最為重要同時(shí)也是存在最為廣泛的修飾方式。因此,本研究以小黑楊(Populus simonii×P.nig

2、ra)為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)TiO2和SCX相結(jié)合的方式富集其磷酸化肽段,并通過(guò)質(zhì)譜鑒定技術(shù)進(jìn)行小黑楊磷酸化蛋白質(zhì)圖譜的構(gòu)建。通過(guò)這種方法,筆者從小黑楊幼嫩葉片蛋白質(zhì)組中鑒定得到了98個(gè)蛋白質(zhì)的114個(gè)磷酸化位點(diǎn),包括21個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)和93個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)。其中104個(gè)位點(diǎn)為從未報(bào)道過(guò)的新發(fā)現(xiàn)位點(diǎn),占總鑒定位點(diǎn)的91.23％。目前,這是木本植物中最大的磷酸化位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。此外,對(duì)鑒定得到的磷酸化位點(diǎn)分別根據(jù)細(xì)胞組件、分子功能及生物學(xué)途徑

3、進(jìn)行分類,綜合分析小黑楊磷酸化蛋白質(zhì)的分布情況及參與的生理過(guò)程。
　　 為更好的了解木本植物光合作用的機(jī)理,本研究還對(duì)小黑楊類囊體膜蛋白進(jìn)行了鑒定分析。應(yīng)用Blue-native Page凝膠電泳技術(shù),通過(guò)特定的非離子去污劑將類囊體膜蛋白復(fù)合體直接溶解,在非變性的條件下根據(jù)復(fù)合體大小將其分離,此后進(jìn)一步在變性條件下將復(fù)合體的各組成亞基分離,結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)從而完成了對(duì)45個(gè)非冗余小黑楊類囊體膜蛋白的鑒定,并根據(jù)類囊體的結(jié)構(gòu)與功能對(duì)其