小黑楊葉片磷酸化蛋白質(zhì)組及類囊體膜蛋白復(fù)合體的鑒定與分析.pdf

1、森林植物是陸地生態(tài)系統(tǒng)的主體,是人類最主要的可持續(xù)利用資源,為更有效地利用林木資源并完成其可持續(xù)發(fā)展的過程,需要對生物體內(nèi)生理功能的執(zhí)行者——蛋白質(zhì)進行深入細致的研究。但是對許多重要生理過程的調(diào)控不僅僅是通過改變蛋白質(zhì)種類及其表達豐度的就能完成的,更重要的是那些具有時空特異性分布的可逆翻譯后修飾。在眾多的翻譯后修飾中可逆的磷酸化修飾是最為重要同時也是存在最為廣泛的修飾方式。因此,本研究以小黑楊(Populus simonii×P.nig

2、ra)為實驗材料,通過TiO2和SCX相結(jié)合的方式富集其磷酸化肽段,并通過質(zhì)譜鑒定技術(shù)進行小黑楊磷酸化蛋白質(zhì)圖譜的構(gòu)建。通過這種方法,筆者從小黑楊幼嫩葉片蛋白質(zhì)組中鑒定得到了98個蛋白質(zhì)的114個磷酸化位點,包括21個蘇氨酸磷酸化位點和93個絲氨酸磷酸化位點。其中104個位點為從未報道過的新發(fā)現(xiàn)位點,占總鑒定位點的91.23％。目前,這是木本植物中最大的磷酸化位點數(shù)據(jù)庫。此外,對鑒定得到的磷酸化位點分別根據(jù)細胞組件、分子功能及生物學(xué)途徑

3、進行分類,綜合分析小黑楊磷酸化蛋白質(zhì)的分布情況及參與的生理過程。
　　 為更好的了解木本植物光合作用的機理,本研究還對小黑楊類囊體膜蛋白進行了鑒定分析。應(yīng)用Blue-native Page凝膠電泳技術(shù),通過特定的非離子去污劑將類囊體膜蛋白復(fù)合體直接溶解,在非變性的條件下根據(jù)復(fù)合體大小將其分離,此后進一步在變性條件下將復(fù)合體的各組成亞基分離,結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)從而完成了對45個非冗余小黑楊類囊體膜蛋白的鑒定,并根據(jù)類囊體的結(jié)構(gòu)與功能對其