廣適性秈稻繼代培養(yǎng)基的研制及其高效農桿菌轉化體系的建立.pdf

1、秈稻是我國水稻的主要栽培種，其高效的遺傳轉化和大規(guī)模的轉基因新品種培育對確保我國未來的糧食安全將具有重大的戰(zhàn)略和現實意義。本論文選用了具代表性強，基因型差異大的5個秈型水稻品種93-11、明恢63、307S、檳榔紅和893為實驗材料；通過培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的調整，篩選出了適合秈稻愈傷繼代的培養(yǎng)基，并在此基礎上開發(fā)出高效的秈稻遺傳轉化體系。主要結果如下：
　　 1、利用每毫升添加2mg2,4-D的MS基本培養(yǎng)基誘導5個秈稻品種的成熟

2、胚都獲得了生長狀況良好的初生愈傷，表現為顏色鮮黃，外表干燥不粘稠，質地緊密結實，細胞質濃厚。
　　 2、以MS，N6和B5基本培養(yǎng)基為參考，對繼代培養(yǎng)基的無機鹽大量、微量元素，有機成分，激素配比和氨基酸含量進行了系統(tǒng)的優(yōu)化，篩選出適合秈稻愈傷繼代培養(yǎng)的繼代培養(yǎng)基WA（MS大量元素和N6有機成分，5xB5微量元素，0.5g/l glutamine，2.8g/l proline）。將供試的5秈稻個品種的初生愈傷分別轉移到MS、N6、

3、B5和WA培養(yǎng)基中進行定量的比較分析，結果顯示，5個品種的初生愈傷經WA培養(yǎng)基繼代后的胚性愈傷生長率及其綠苗分化率都明顯高于MS、N6和B5培養(yǎng)基。ANOVA方差分析表明，在不同品種間和繼代培養(yǎng)基間統(tǒng)計出的愈傷生長率和綠苗分化率都存在顯著差異（P<0.01）。
　　 3、潮霉素的抗性測試表明，93-11和307S在50mg/l，明恢63在60mg/l，檳榔紅和893在75mg/l的潮霉素濃度下，其愈傷組織停止生長。因此，對于相應

4、的供試秈稻品種而言，這些潮霉素濃度是有效的篩選濃度。
　　 4、5個秈稻品種的初生愈傷經WA培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)及基因轉化后的潮霉素篩選，都成功地獲得了抗性愈傷。隨后的GFP綠色熒光信號檢測和hph擴增驗證證實，其兩者的陽性率在供試品種93-11、明恢63、307S、檳榔紅和893上依次分別為4.1％/2.7％、36.8％/25.0％、10.5％/8.5％、37.1％/34.3％和43.8％/33.9％，不同的基因型之間存在顯著差異。

5、就愈傷的生長狀況來講，5個秈稻品種的抗性愈傷均顯現出活力旺盛、質地致密和細胞質濃厚的特點，反應其具有較強的胚性。
　　 5、基于優(yōu)化改良的WA繼代培養(yǎng)基，建立了高效的秈稻遺傳轉化體系。遺傳轉化測試表明，5個秈稻品種的再生苗的PCR檢測陽性率都在70％以上，平均達85％左右：以接種愈傷數為基準統(tǒng)計的轉化率分別為：93-11的2.7％，明恢63的20.2％，307S的8.5％，檳榔紅的24.0％和893的25.6％。