馬氏珠母貝肉降血壓肽分離純化研究.pdf

1、馬氏珠母貝是培育南珠的主要貝類，貝肉蛋白質(zhì)經(jīng)過堿性蛋白酶酶解可得到體外對血管緊張素轉(zhuǎn)換酶具有抑制作用的降血壓肽，本試驗經(jīng)過一系列的分離純化過程得到了降血壓活性高的多肽，有望對應(yīng)用生物工程高新技術(shù)開發(fā)水產(chǎn)蛋白酶解降血壓肽以作為功能食品或藥品原料提供技術(shù)支持和理論基礎(chǔ)，并為提高我國水產(chǎn)加工水平做出貢獻，具有相當(dāng)重要的意義。
　　 采用高效液相色譜法檢測了馬氏珠母貝蛋白原料氨基酸的組成和含量，結(jié)果表明組成馬氏珠母貝蛋白的氨基酸品種齊全

2、，貝肉中18種氨基酸總含量達到916.08mg.g-1Pro，其中8種必需氨基酸和18種氨基酸的配比、含量均符合聯(lián)合國糧農(nóng)/世界衛(wèi)生組織所規(guī)定的理想蛋白質(zhì)模式。馬氏珠母貝蛋白中非極性氨基酸和芳香氨基酸含量較高，占18種氨基酸總組成的37.17％，說明馬氏珠母貝肉蛋白質(zhì)是開發(fā)功能食品降血壓肽的優(yōu)質(zhì)原料。
　　 酶解產(chǎn)物超濾后，10kDa滲透液采用離子交換樹脂精制，通過靜態(tài)吸附選定717陰離子交換樹脂，經(jīng)過動態(tài)吸附考察，得到的最佳離

3、子交換分離條件為：5g濕樹脂，濕法上柱，11.741mg.mL-1貝肉超濾液上樣10mL，上樣速度、蒸餾水洗、0.5mol.L1lNaC1洗脫流速均為1.OmL-min-1。分離獲得的2個組分中，降血壓活性組分主要集中在洗脫峰I2＃中，其IC50值為：0.0790mg.mL-1活性回收率為：114.39％。
　　 采用凝膠層析進一步分離洗脫峰I2＃，得到的適宜分離條件為：蒸餾水為洗脫劑，貝肉肽上樣量為11.27mg.mL，上樣1

4、.0mL，柱規(guī)格為20x450mm，洗脫流速為0.8mL-min-l，分離獲得的4個組分中，降血壓活性組分主要集中在G2＃中，其IC50值為：0.0687mg.mL-1，活性回收率為：51.49％。經(jīng)過高效液相體積排阻色譜定性分析各組份分子量分布情況表明：各組分中含有的多肽分子量不同，達到了分離的效果。
　　 將凝膠層析所得的G2＃組分利用半制備色譜分離獲得的6個組分中，降血壓活性組分主要集中在H5＃，1Cs0為0.0170mg

5、'mL-1。H5＃經(jīng)過第二次高效液相色譜分離之后得到單一組分H51＃，0.00537mg-mL-l的H51＃對ACE的抑制率為30.95％，H51＃是分子量為2674.16Da的多肽，經(jīng)高效毛細管電泳驗證其為單一組分。
　　 進行了酶解和離子交換工藝放大試驗，結(jié)果表明，相同條件下放大5倍后，水解度由21％提高到了27.99％，蛋白質(zhì)回收率由88.90％提高到了90.25％；離子交換的線性放大后可以發(fā)現(xiàn)穿透峰蛋白質(zhì)回收率基本不變，