連接粘附分子2在小鼠早期妊娠子宮中的表達(dá)、調(diào)節(jié)與功能.pdf

1、哺乳動(dòng)物胚胎的成功著床需要具有黏附能力的活性囊胚和具有接受能力子宮內(nèi)膜之間成功的建立分子對(duì)話，并進(jìn)行進(jìn)一步的相互作用，著床過(guò)程可分為定位、黏附和侵入三個(gè)階段。胚胎的著床過(guò)程受到卵巢分泌的類固醇激素雌激素和孕酮的控制，雌激素和孕酮協(xié)同調(diào)節(jié)子宮細(xì)胞的增殖和分化，時(shí)空特異性地控制子宮著床窗口的打開(kāi)。本研究室利用基因芯片分析發(fā)現(xiàn)連接粘附分子2在小鼠早期妊娠第3天和第4天有高表達(dá)，提示該分子在小鼠胚胎著床窗口的開(kāi)放中可能起到重要作用。連接粘附分子

2、家族屬于免疫球蛋白超家族，是細(xì)胞粘附分子中的一員，我們利用原位雜交、免疫組織化學(xué)、Real-time PCR、Western blot、胚胎黏附分析以及子宮角抗體注射等方法，對(duì)連接粘附分子家族特別是Jam2在小鼠早期妊娠子宮中的表達(dá)、調(diào)節(jié)及功能進(jìn)行了深入的研究。
　　 Jam2 mRNA在早期妊娠第1天和第2天的小鼠子宮中基本沒(méi)有表達(dá)，在第3天和第4天腔上皮有強(qiáng)表達(dá)，在腺上皮弱表達(dá)，在第5天Jam2 mRNA的信號(hào)較弱，在早期妊

3、娠第7天和第8天的小鼠子宮系膜側(cè)的血管內(nèi)皮細(xì)胞有強(qiáng)表達(dá)。Jam2蛋白的表達(dá)模式與mRNA類似，不同的是第3天子宮腔上皮的表達(dá)較弱而只有第4天表達(dá)很強(qiáng)，在第4天中午12:00到下午16:00 Jam2蛋白的表達(dá)最強(qiáng)。在第5天著床點(diǎn)的腔上皮還有少量蛋白的表達(dá)，在第7天和第8天的小鼠子宮系膜側(cè)的血管內(nèi)皮細(xì)胞同樣有強(qiáng)表達(dá)。使用Real-time PCR和Western blot得到的定量分析結(jié)果與上述定位分析基本一致。
　　 Jam2在

4、早期妊娠子宮中的表達(dá)受到孕酮誘導(dǎo)，卵巢切除的小鼠子宮中Jam2 mRNA和蛋白的表達(dá)在孕酮處理后6-12 h后被明顯誘導(dǎo)。使用孕酮受體拮抗劑米非司酮（RU486）可以抑制孕酮對(duì)Jam2的誘導(dǎo)，說(shuō)明孕酮可以通過(guò)其核受體PR誘導(dǎo)Jam2的表達(dá)。RU486處理早期妊娠第4天的小鼠可以抑制子宮中Jam2 mRNA和蛋白的表達(dá)，說(shuō)明早期妊娠中體內(nèi)Jam2的表達(dá)也是受到孕酮及其核受體的調(diào)節(jié)的。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Msx1介導(dǎo)了孕酮對(duì)Jam2表達(dá)的

5、調(diào)節(jié)，Msx1在卵巢切除和早期妊娠的小鼠子宮中都受到孕酮及其核受體的調(diào)節(jié)，使用電穿孔的方法在體外培養(yǎng)的小鼠子宮內(nèi)膜腔上皮組織中過(guò)表達(dá)Msx1，可以上調(diào)Jam2的表達(dá)。
　　 另外，我們發(fā)現(xiàn)雌激素可以在短時(shí)間內(nèi)上調(diào)卵巢切除小鼠子宮中Jam2的表達(dá)，其下游分子LIF也可以通過(guò)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子Stat3的磷酸化從而促進(jìn)Jam2表達(dá)的上調(diào)。使用LIF或Stat3磷酸化抑制劑處理均可影響腔上皮組織中Jam2的表達(dá)，通過(guò)電穿孔的方

6、法將持續(xù)活化的c-Stat3載體導(dǎo)入體外培養(yǎng)的小鼠子宮內(nèi)膜腔上皮組織中也可以明顯上調(diào)Jam2的表達(dá)。
　　 黏附分析的結(jié)果證明，包被重組Jam2蛋白可以促進(jìn)酶標(biāo)板底部孵化胚胎的黏附，而可溶性的重組Jam2蛋白和重組Jam3蛋白可以抑制這種促進(jìn)作用。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，注射Jam2抗體的子宮角著床胚胎數(shù)量遠(yuǎn)低于注射山羊IgG的對(duì)照側(cè)，表明Jam2可以促進(jìn)胚胎和子宮內(nèi)膜腔上皮之間相互作用。這些結(jié)果說(shuō)明Jam2可能通過(guò)介導(dǎo)孵化胚胎在子宮內(nèi)膜