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文檔簡介
1、 II2.4.2 原位雜交實(shí)驗(yàn).................................................................................................................23 2.5 實(shí)時(shí)定量 PCR.............................................................................
2、..........................................25 2.5.1 RNA 提取........................................................................................................................25 2.5.2 反轉(zhuǎn)錄 ..............................
3、..............................................................................................26 2.5.3 引物序列 ................................................................................................................
4、........26 2.5.4 實(shí)時(shí)定量 PCR 反應(yīng).......................................................................................................26 2.5.5 融解曲線分析..........................................................................
5、.......................................27 2.6 WESTERN BLOT.......................................................................................................................27 2.6.1 試劑及溶液 ............................
6、........................................................................................27 2.6.2 樣品提取及蛋白濃度測定.............................................................................................28 2.6.3 SDS 聚丙烯酰胺凝
7、膠電泳 .............................................................................................28 2.6.4 Immunoblot 及 ECL 顯影 ..............................................................................................
8、.30 2.7 CEBPB 過表達(dá).........................................................................................................................30 2.8 載體構(gòu)建與熒光素酶活性分析..............................................................
9、..............................31 2.8.1 重組質(zhì)粒 Abp1-pGL3 的構(gòu)建.......................................................................................31 2.8.2 Abp1 啟動(dòng)子序列定點(diǎn)突變.....................................................
10、.......................................32 2.8.3 熒光素酶活性分析.........................................................................................................33 2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) ...............................................
11、................................................................................33 3 結(jié)果 ....................................................................................................................................
12、..........34 3.1 ABP1 探針制備.......................................................................................................................34 3.2 ABP1 在早期妊娠圍著床期小鼠子宮中的表達(dá) .............................................
13、......................34 3.2.1 原位雜交檢測 Abp1 在早期妊娠圍著床期小鼠子宮中的表達(dá) ..................................34 3.2.2 圍著床期 Abp1 表達(dá)的定量分析..................................................................................34 3.3 活性胚泡對 ABP1
14、 表達(dá)的影響..............................................................................................35 3.3.1 原位雜交檢測 Abp1 mRNA 在假孕子宮中的表達(dá) .....................................................35 3.3.2 原位雜交檢測 Abp1 mRNA 在延遲著床
15、和激活子宮中的表達(dá)..................................35 3.4 蛻膜化過程中 ABP1 的表達(dá)..................................................................................................35 3.4.1 原位雜交檢測 Abp1 mRNA 在體內(nèi)蛻膜化中的表達(dá).....................
16、.............................35 3.4.2 實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測誘導(dǎo)蛻膜化中 Abp1 的表達(dá) ........................................................35 3.4.3 cAMP 對 Abp1 表達(dá)的調(diào)節(jié) ........................................................................
17、...................36 3.4.4 阿米洛利（amiloride）對蛻膜化過程的調(diào)節(jié)..............................................................38 3.5 類固醇激素對 ABP1 作用.....................................................................................
18、.................38 3.5.1 實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測激素對 Abp1 mRNA 的調(diào)節(jié)........................................................39 3.5.2 Western Blot 檢測孕酮對 Abp1 蛋白的調(diào)節(jié).................................................................39 3.6
19、組胺和腐胺對子宮基質(zhì)細(xì)胞中 ABP1 表達(dá)的影響..............................................................40 3.6.1 組胺和腐胺對細(xì)胞中 Abp1 mRNA 表達(dá)水平的調(diào)節(jié)..................................................40 3.6.2 組胺對細(xì)胞中 Abp1 蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)....................
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