谷氨酰胺二肽在斷奶仔豬離體空腸的轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)和對(duì)空腸發(fā)育影響的研究.pdf

1、為研究丙氨酰谷氨酰胺二肽(Alanylglutaminedipeptide,Ala-Gln)和甘氨酰谷氨酰胺二肽(Glycylglutaminedipeptide,Gly-Gln)在斷奶仔豬腸道中的降解、吸收特點(diǎn)和兩種二肽對(duì)斷奶仔豬腸道發(fā)育的影響，本研究進(jìn)行了以下三個(gè)試驗(yàn)：
　　 試驗(yàn)一：谷氨酰胺二肽在斷奶仔豬離體空腸的水解
　　 本試驗(yàn)旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在斷奶仔豬空腸中的水解特點(diǎn)。試驗(yàn)采用體

2、外培養(yǎng)斷奶仔豬外翻腸段的方法，將培養(yǎng)液分三個(gè)處理（空白對(duì)照組、Ala-Gln二肽組和Gly-Gln二肽組），每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)一個(gè)腸段，37℃恒溫孵育60min，每5min取樣一次，通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)液中完整二肽的含量來(lái)研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在空腸中的水解情況。結(jié)果如下：在孵育60min后，培養(yǎng)液中Ala-Gln二肽含量為9.00±1.57mmol/L,Gly-Gln二肽含量為8.85±1.78mmol/L，兩種二

3、肽濃度差異不顯著(P＞0.05)；孵育60min后，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽的降解速率分別是0.17±0.03mmol/L/min、0.19±0.03mmol/L/min，兩者之間差異不顯著(P＞0.05)。結(jié)果表明：60min內(nèi)Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在斷奶仔豬腸段培養(yǎng)液中的含量均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低,但并未完全降解，本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究這兩種小肽的完整吸收提供了依據(jù)。
　　 試驗(yàn)二：谷氨酰胺二肽在

4、斷奶仔豬離體空腸中的吸收特點(diǎn)
　　 本試驗(yàn)旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在斷奶仔豬空腸中的吸收特點(diǎn)。試驗(yàn)采用外翻腸囊的方法，將培養(yǎng)液分五個(gè)處理，即空白對(duì)照組、Ala-Gln二肽組、游離Ala+Gln組、Gly-Gln二肽組和游離Gly+Gln組，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)一個(gè)外翻腸囊，37℃恒溫孵育40min后取樣，通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)液、漿膜液和組織勻漿液中完整二肽和單體谷氨酰胺的含量，來(lái)研究Ala-Gln二肽和Gly

5、-Gln二肽在小腸中的吸收情況。結(jié)果如下：Ala-Gln的吸收量和吸收速率分別是10.26±0.74mmol/L、0.26±0.02mmol/L/min，顯著高于Gly-Gln吸收量和吸收速率(分別是7.25±1.47mmol/L、0.18±0.04mmol/L/min)(P＜0.05);Gly-Gln二肽吸收量（速率）高于Gly+Gln處理的中Gln吸收量（速率），Ala-Gln二肽吸收量（速率）顯著高于Ala+Gln處理中Gln吸收

6、量（速率）(P＜0.05)；游離Ala+Gln處理中Gln吸收量和轉(zhuǎn)運(yùn)速率分別是7.28±0.54mmol/L和0.18±0.01mmol/L/min，均高于Gly+Gln處理中Gln吸收量和吸收速率(P＜0.05),分別是4.79±0.54mmol/L和0.12±0.01mmol/L/min。以上結(jié)果表明，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽均能以完整形式被迅速吸收；Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽吸收速率，高于游離

7、谷氨酰胺吸收速率。
　　 試驗(yàn)三：谷氨酰胺二肽對(duì)斷奶仔豬空腸發(fā)育的影響
　　 本試驗(yàn)旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽對(duì)斷奶仔豬空腸發(fā)育的影響。采用體外培養(yǎng)腸組織的方法，將培養(yǎng)液分為三個(gè)試驗(yàn)組：空白對(duì)照組、Ala-Gln組和Gly-Gln二肽組；兩個(gè)二肽組分別包括2mmol/L、4mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L相應(yīng)二肽處理，將組織置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，95％O237℃恒溫培

8、養(yǎng)48h～96h，通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的活性、腸組織蛋白含量、谷氨酰胺酶和二胺氧化酶活力、BrdU摻入細(xì)胞核的情況、Caspase-3表達(dá)情況，來(lái)研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽對(duì)腸組織中谷氨酰胺代謝、細(xì)胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，添加Ala-Gln二肽或Gly-Gln二肽后能降低培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶活力；能顯著提高斷奶仔豬空腸組織蛋白含量(P＜0.05)、谷氨酰胺酶活力(P＜0，05)和二胺氧化酶活力

9、(P＜0.05)，且隨著二肽濃度提高而逐漸增加，當(dāng)Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽濃度分別為20mmol/L、30mmol/L時(shí)，空腸組織蛋白含量和二胺氧化酶活力最高，當(dāng)兩種二肽濃度均為20mmol/L時(shí)，空腸組織谷氨酰胺酶活力最高；Ala-Gln二肽和Gly-G1n二肽都能顯著提高BrdU摻入細(xì)胞核的陽(yáng)性細(xì)胞百分比(P＜0.01)、增加BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度(P＜0.01)，均隨著二肽濃度提高而逐漸增加，當(dāng)兩種二肽濃度

10、均為30mmol/L時(shí)效果最佳；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能顯著降低腸組織Caspase-3免疫陽(yáng)性細(xì)胞百分比(P＜0.01)和Caspase-3免疫陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度(P＜0.01)，隨著二肽濃度增加而逐漸降低；兩種二肽濃度在20mmol/L與30mmol/L時(shí)，作用效果差異不顯著(P＞0.05)。結(jié)果表明，Ala-Gln二肽、Gly-Gln二肽通過(guò)提高腸組織谷氨酰胺代謝酶活力而加強(qiáng)組織對(duì)Gln利用，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑

11、制細(xì)胞凋亡、提高空腸組織蛋白含量。谷氨酰胺二肽作用效果隨其濃度提高而呈劑量依賴效應(yīng)，且相同濃度的兩種二肽作用效果基本一致。當(dāng)兩種二肽濃度均為20mmol/L時(shí)，空腸組織谷氨酰胺酶活力最高；當(dāng)Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽濃度分別是20mmol/L、30mmol/L時(shí)，空腸組織蛋白含量和二胺氧化酶活力最高；當(dāng)兩種二肽濃度為30mmol/L時(shí)，其促進(jìn)空腸細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡效果最佳。
　　 綜上所述，Ala-Gln二肽和G

12、ly-Gln二肽在斷奶仔豬空腸培養(yǎng)液中培養(yǎng)60min后并不完全被降解，其降解速率分別是0.17±0.03mmol/L/min,0.19±0.03mmol/L/min。40min內(nèi)，Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽能以完整形式被吸收，吸收量分別是10.26±0.74mmol/L和7.25±1.47mmol/L;Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽，高于游離谷氨酰胺吸收速率。Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽通過(guò)提高空