克氏原螯蝦C型凝集素的表達(dá)與功能研究.pdf

1、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)又叫淡水小龍蝦,是我國(guó)重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,同時(shí)也是是一種比較好的研究甲殼綱動(dòng)物先天免疫的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在克氏原螯蝦中,發(fā)現(xiàn)了很多免疫相關(guān)的基因,包括模式識(shí)別受體及免疫效應(yīng)分子等。
　　 C-型凝集素是一類鈣依賴型糖結(jié)合蛋白超家族。它們?cè)谙忍烀庖咧凶鳛槟Ｊ阶R(shí)別受體發(fā)揮作用,并具有其他多種功能。為了更深入的了解C-型凝集素在克氏原螯蝦中的功能多樣性,我們對(duì)其凝集素進(jìn)行了表達(dá)與功能研究。

2、通過(guò)對(duì)克氏原螯蝦血細(xì)胞cDNA文庫(kù)進(jìn)行隨機(jī)測(cè)序并利用BLAST進(jìn)行比對(duì),得到了一個(gè)C-型凝集素的cDNA,我們把它命名為PcLec5。該eDNA序列全長(zhǎng)為771bp,其中開(kāi)放閱讀框?yàn)?16bp,編碼一個(gè)含有171個(gè)氨基酸的蛋白。除此之外,5'和3'的非編碼區(qū)分別為20和235bp。PcLec5含有一個(gè)17個(gè)氨基酸的信號(hào)肽,說(shuō)明其是一個(gè)分泌型蛋白。Smart分析表明其含有一個(gè)CTLD結(jié)構(gòu)域,其結(jié)構(gòu)域共含135個(gè)氨基酸。
　　 通過(guò)

3、半定量RT-PCR分析,PcLec5的mRNA在肝胰腺中特異存在,且含量較高。為了研究PcLec5的可能的功能,我們分別用鰻弧菌和金黃色葡萄球菌刺激螯蝦,利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了PcLec5在刺激后的表達(dá)模式。我們發(fā)現(xiàn),在受到鰻弧菌刺激后,PcLec5的表達(dá)水平迅速提高,在刺激后12小時(shí)達(dá)到頂峰,之后逐步下降;在受到金黃色葡萄球菌刺激后,表達(dá)緩慢上升,在48小時(shí)升至最高,之后恢復(fù)至正常水平,這種變化表明PcLec5可能參與了先天免疫反應(yīng)