克氏原螯蝦C型凝集素的表達與功能研究.pdf

1、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)又叫淡水小龍蝦,是我國重要的水產經濟動物,同時也是是一種比較好的研究甲殼綱動物先天免疫的實驗動物。在克氏原螯蝦中,發(fā)現了很多免疫相關的基因,包括模式識別受體及免疫效應分子等。
　　 C-型凝集素是一類鈣依賴型糖結合蛋白超家族。它們在先天免疫中作為模式識別受體發(fā)揮作用,并具有其他多種功能。為了更深入的了解C-型凝集素在克氏原螯蝦中的功能多樣性,我們對其凝集素進行了表達與功能研究。

2、通過對克氏原螯蝦血細胞cDNA文庫進行隨機測序并利用BLAST進行比對,得到了一個C-型凝集素的cDNA,我們把它命名為PcLec5。該eDNA序列全長為771bp,其中開放閱讀框為516bp,編碼一個含有171個氨基酸的蛋白。除此之外,5'和3'的非編碼區(qū)分別為20和235bp。PcLec5含有一個17個氨基酸的信號肽,說明其是一個分泌型蛋白。Smart分析表明其含有一個CTLD結構域,其結構域共含135個氨基酸。
　　 通過

3、半定量RT-PCR分析,PcLec5的mRNA在肝胰腺中特異存在,且含量較高。為了研究PcLec5的可能的功能,我們分別用鰻弧菌和金黃色葡萄球菌刺激螯蝦,利用實時定量PCR檢測了PcLec5在刺激后的表達模式。我們發(fā)現,在受到鰻弧菌刺激后,PcLec5的表達水平迅速提高,在刺激后12小時達到頂峰,之后逐步下降;在受到金黃色葡萄球菌刺激后,表達緩慢上升,在48小時升至最高,之后恢復至正常水平,這種變化表明PcLec5可能參與了先天免疫反應