蘋果輪紋病菌對戊唑醇的敏感性與分子檢測.pdf

1、蘋果輪紋病是蘋果生產上的一種重要病害，主要危害蘋果枝干和果實，因其防治難、危害重，是目前我國蘋果生產的重要制約因素之一。
　　 為了明確蘋果輪紋病菌對三唑類殺菌劑戊唑醇的敏感性現狀，從有代表性的蘋果種植區(qū)采集、分離了98個蘋果輪紋病菌（Botryosphaeria berengerianaf.sp.Piricola）菌株，采用菌絲生長速率法測定其對戊唑醇的敏感性。結果表明，戊唑醇對98個菌株的EC50值在0.0054-3.325

2、3 mg/L，平均值為0.4256±0.1090mg/L。其中，菌株XX2B（EC50為3.3253 mg/L）對戊唑醇的敏感性較低，QF2（EC50為0.0054 mg/L）對其最敏感，其毒力倍數是XX2B的620.38倍。山東省、陜西省、河南省和遼寧省的蘋果輪紋菌對戊唑醇的EC50平均值分別為0.5715±0.4612 mg/L、0.5348±0.6935 mg/L、0.4020±0.1006 mg/L和0.2667±0.2083m

3、g/L，表明遼寧省的蘋果輪紋菌對戊唑醇的敏感程度最高，山東省的敏感性最低。但不同地理來源的蘋果輪紋病菌對戊唑醇的敏感性差異不明顯。
　　 應用人工接種的方法，對不同地理區(qū)域、不同敏感性的33個B.berengrianaf.sp.piricola在蘋果枝干上接種后的致病力分化進行了研究。結果顯示：蘋果輪紋病菌菌株存在致病力分化現象，來自蘋果主產區(qū)33株蘋果輪紋病菌接種在蘋果枝條上的病情指數平均值為25.94+4.82，不同的菌株接

4、種在蘋果枝條上的病情指數差異顯著。
　　 采用3種不同的提取方法（尿素提取法、氯化芐提取法以及SDS-CTAB提取法）對蘋果輪紋病菌的基因組DNA進行提取和比較。結果表明，三種方法均能提取到蘋果輪紋病菌的基因組DNA。其中，SDS-CTAB法效率最高，提取的DNA質量最好，但是耗時較長；尿素提取法操作簡單快速，但是提取的DNA質量較低；氯化芐提取法獲得的DNA純度最低，蛋白質污染嚴重。三種方法所提取的DNA經ITS試驗檢測與電泳

5、結果分析表明：DNA擴增效果良好，可滿足該真菌rDNA ITS分析的要求。
　　 利用引物ITS1/ITS4和Bt2a/Bt2b克隆了蘋果輪紋菌ITS序列和β-tubulin基因片段并測序。截取蘋果輪紋菌rDNA的ITS和β-tubulin基因序列，與其它輪紋菌進行核苷酸序列比對，發(fā)現敏感性較低的三株蘋果輪紋菌（QF8B，PL7，XX2B）與Botryosphaeria rhodina的ITS和β-tubulin序列相似性高達9