暗黑鰓金龜腸道共生菌分子多態(tài)性研究.pdf

1、暗黑鰓金龜（Holotrichia parallela），在我國分布廣，種群數(shù)量大。通過研究暗黑鰓金龜幼蟲腸道細菌多樣性，可以為探討腸道細菌對幼蟲的生理功能和生態(tài)學(xué)意義奠定基礎(chǔ)，為進一步了解暗黑鰓金龜幼蟲與其共生菌的協(xié)同進化、物種進化途徑提供新的認知，最終為防治其危害提供新思路。
　　 本研究通過利用16s rRNA基因序列分析和PCR-DGGE分析技術(shù)研究了暗黑鰓金龜幼蟲不同齡期中、后腸和山東自然種群腸道細菌多樣性。
　

2、　 1.從暗黑鰓金龜三種不同齡期的幼蟲中腸腸道中分離到了35種不同細菌遺傳型，分屬于7個不同的細菌綱，分別是δ-變形菌綱（Deltaproteobacteris）、放線菌綱（Actinobacteria）、β-變形菌綱（Betaproteobacteria）、α-變形菌綱（Alphaproteobacteria）、γ-變形菌綱（Gammaproteobacteria）、梭菌綱（Clostridia）和擬桿菌綱（Bacteroidete

3、s）。而且不論是在哪一個齡期，γ-變形菌綱和梭菌綱的細菌合起來都超過了總數(shù)的80％，是中腸腸道細菌的絕對優(yōu)勢細菌菌群。此外，在一齡幼蟲腸道里，只有β-變形菌綱、δ-變形菌綱、γ-變形菌綱、梭菌綱和擬桿菌綱5個綱的細菌，到了二齡時，除了上述5個綱細菌外，還分離到了另外一個新的綱-放線菌綱的細菌，占中腸細菌總數(shù)的3.33％。到了三齡時，又分離到了α-變形菌綱的細菌，這說明隨著幼蟲齡期的增加，其體內(nèi)細菌的種類和比例也在隨著發(fā)生改變，其細菌種類

4、的多樣性也隨之增加。
　　 2.從暗黑鰓金龜三種不同齡期的幼蟲后腸腸道中分離到了57種不同細菌遺傳型，在分類上分別屬于δ-變形菌綱、β-變形菌綱、α-變形菌綱、γ-變形菌綱、梭菌綱、擬桿菌綱、放線菌綱和芽孢桿菌綱（Bacilli），其中，α-變形菌綱的細菌在一齡幼蟲后腸中沒有檢測到，到了二齡才開始出現(xiàn)，這也說明了幼蟲腸道細菌多樣性會隨著齡期的增長而增加。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，不論是在一齡，二齡還是三齡幼蟲后腸內(nèi)，梭菌綱細菌都是絕對的

5、優(yōu)勢菌群，占了后腸細菌的很大一部分。其中有3種細菌在所有齡期的幼蟲后腸都檢測到了，占了梭菌綱細菌種類總數(shù)的16.7％，說明梭菌綱的細菌和暗黑鰓金龜幼蟲的關(guān)系非常密切，在幼蟲整個生活期內(nèi)都存在于后腸內(nèi)。
　　 3.從暗黑鰓金龜山東自然種群中腸分離到24種不同細菌遺傳型，從后腸分離出58種不同細菌遺傳型，其中有9株菌在中、后腸內(nèi)都存在，也就是說一共從山東自然種群內(nèi)分離得到73種細菌遺傳型，這充分說明了暗黑鰓金龜幼蟲腸道細菌的多樣性。