青海地區(qū)野生動物H7N2亞型流感病毒遺傳進化及致病性分析.pdf

1、H7亞型流感病毒能夠感染多種禽類及哺乳動物，最近幾年，HPAI和LPAIH7N1、H7N2、H7N3、H7N4和H7N7病毒已經(jīng)引起了至少750萬家禽被撲殺，更重要的是，H7亞型流感病毒可以感染人，2002年以來在荷蘭、意大利、加拿大和美國以及英國等國已經(jīng)至少發(fā)生了100次人感染A型H7流感事件，表明H7亞型流感病毒具有全球公共安全風險。家禽中H7亞型流感病毒分離的日益增加和該亞型病毒造成人類疾病的能力，提示需要持續(xù)地監(jiān)測H7病毒并了解

2、其特征。2006～2009年間，我們在青海地區(qū)收集的鳥類、老鼠和鼠兔樣本中分離到20株H7N2病毒。本研究對這些毒株開展了分子進化和致病性研究，以期了解H7亞型流感病毒在野生動物中的進化和對我國養(yǎng)殖業(yè)及公共安全的潛在威脅。
　　 通過反轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)技術擴增了2006～2009年分離自青海野生鳥類、老鼠、鼠兔的A/Twite/Niaodaobinguan/0601/06，A/Mouse/Niaodao/06

3、01/06，A/Pika/Xingxinghai/0601/06等20株H7N2流感病毒的8個基因片段，即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因，將其分別克隆到PMD18-T載體后進行序列測定，并將測序結果與GenBank發(fā)表的相應基因序列進行比較分析。結果表明：所克隆到的8個片段均包含相應病毒基因的完整開放閱讀框架。20株H7N2病毒不論分離時間、地點和宿主的差異，各個基因同源性均高達99％以上，說明這些H7N2病毒來源

4、于同一祖先，且病毒變異率很低。青海H7N2病毒與香港1978年分離的H7N2病毒A/dk/Hong Kong/293/1978(簡稱香港H7N2病毒)比較，除NS基因外，其它基因片段與青海H7N2病毒同源性均達到99％，而與青海地區(qū)H5N1病毒內部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS同源性均在95％以下，說明A/dk/Hong Kong/293/1978(H7N2)病毒是青海野生動物H7N2病毒的PB2、PB1、PA、HA、NP、N

5、A、M基因供體，推斷香港H7N2病毒以某種方式直接或者與某病毒NS基因形成重組體傳播到青海地區(qū)，演化形成了青海野生動物的H7N2病毒。遺傳進化分析結果顯示，青海野生動物H7N2病毒與來自中國家雞的H7N2病毒A/chicken/Hebei/1/2002在HA、NA、PA基因上分處不同分支，提示兩者并無直接親緣關系。
　　 HA氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，青海野生動物H7N2病毒的HA裂解位點PEIPKGR是典型的低致病性H7禽流感的分子

6、特征，其受體位點也非常保守(183H、190E、226Q、228G)，為典型禽類受體結合位點；PB2的627位、701位氨基酸表現(xiàn)為627E和701D，提示哺乳動物對這些毒株可能不易感；NA和NS1均無氨基酸的缺失，NS1蛋白C端4個結合細胞內支架蛋白功能的蛋白相互作用區(qū)域氨基酸位點為ESEV，是禽類來源流感的典型代表。M2蛋白中27位和31位氨基酸未顯示病毒的金剛烷胺抗性。這些結果說明分離自青海野生動物的H7N2病毒是源于禽類、不易感

7、染哺乳動物且對金剛烷胺敏感的流感病毒。
　　 通過對來自鼠的A/Mouse/Niaodao/0601/06(MND1)、鼠兔的A/Pika/Xingxinghai/0601/06(PXXH1)和A/Pika/Garila/0601/06(Pgarila)3株H7N2病毒對雞和小鼠的致病性分析，結果表明，3株H7N2病毒對雞的。IVPI均低于1.2，雞在感染病毒后未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，病毒局限在感染雞的呼吸道和消化道復制；小鼠在感