青海地區(qū)野生動(dòng)物H7N2亞型流感病毒遺傳進(jìn)化及致病性分析.pdf

1、H7亞型流感病毒能夠感染多種禽類(lèi)及哺乳動(dòng)物，最近幾年，HPAI和LPAIH7N1、H7N2、H7N3、H7N4和H7N7病毒已經(jīng)引起了至少750萬(wàn)家禽被撲殺，更重要的是，H7亞型流感病毒可以感染人，2002年以來(lái)在荷蘭、意大利、加拿大和美國(guó)以及英國(guó)等國(guó)已經(jīng)至少發(fā)生了100次人感染A型H7流感事件，表明H7亞型流感病毒具有全球公共安全風(fēng)險(xiǎn)。家禽中H7亞型流感病毒分離的日益增加和該亞型病毒造成人類(lèi)疾病的能力，提示需要持續(xù)地監(jiān)測(cè)H7病毒并了解

2、其特征。2006～2009年間，我們?cè)谇嗪５貐^(qū)收集的鳥(niǎo)類(lèi)、老鼠和鼠兔樣本中分離到20株H7N2病毒。本研究對(duì)這些毒株開(kāi)展了分子進(jìn)化和致病性研究，以期了解H7亞型流感病毒在野生動(dòng)物中的進(jìn)化和對(duì)我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)及公共安全的潛在威脅。
　　 通過(guò)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)擴(kuò)增了2006～2009年分離自青海野生鳥(niǎo)類(lèi)、老鼠、鼠兔的A/Twite/Niaodaobinguan/0601/06，A/Mouse/Niaodao/06

3、01/06，A/Pika/Xingxinghai/0601/06等20株H7N2流感病毒的8個(gè)基因片段，即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因，將其分別克隆到PMD18-T載體后進(jìn)行序列測(cè)定，并將測(cè)序結(jié)果與GenBank發(fā)表的相應(yīng)基因序列進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明：所克隆到的8個(gè)片段均包含相應(yīng)病毒基因的完整開(kāi)放閱讀框架。20株H7N2病毒不論分離時(shí)間、地點(diǎn)和宿主的差異，各個(gè)基因同源性均高達(dá)99％以上，說(shuō)明這些H7N2病毒來(lái)源

4、于同一祖先，且病毒變異率很低。青海H7N2病毒與香港1978年分離的H7N2病毒A/dk/Hong Kong/293/1978(簡(jiǎn)稱(chēng)香港H7N2病毒)比較，除NS基因外，其它基因片段與青海H7N2病毒同源性均達(dá)到99％，而與青海地區(qū)H5N1病毒內(nèi)部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS同源性均在95％以下，說(shuō)明A/dk/Hong Kong/293/1978(H7N2)病毒是青海野生動(dòng)物H7N2病毒的PB2、PB1、PA、HA、NP、N

5、A、M基因供體，推斷香港H7N2病毒以某種方式直接或者與某病毒NS基因形成重組體傳播到青海地區(qū)，演化形成了青海野生動(dòng)物的H7N2病毒。遺傳進(jìn)化分析結(jié)果顯示，青海野生動(dòng)物H7N2病毒與來(lái)自中國(guó)家雞的H7N2病毒A/chicken/Hebei/1/2002在HA、NA、PA基因上分處不同分支，提示兩者并無(wú)直接親緣關(guān)系。
　　 HA氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，青海野生動(dòng)物H7N2病毒的HA裂解位點(diǎn)PEIPKGR是典型的低致病性H7禽流感的分子

6、特征，其受體位點(diǎn)也非常保守(183H、190E、226Q、228G)，為典型禽類(lèi)受體結(jié)合位點(diǎn)；PB2的627位、701位氨基酸表現(xiàn)為627E和701D，提示哺乳動(dòng)物對(duì)這些毒株可能不易感；NA和NS1均無(wú)氨基酸的缺失，NS1蛋白C端4個(gè)結(jié)合細(xì)胞內(nèi)支架蛋白功能的蛋白相互作用區(qū)域氨基酸位點(diǎn)為ESEV，是禽類(lèi)來(lái)源流感的典型代表。M2蛋白中27位和31位氨基酸未顯示病毒的金剛烷胺抗性。這些結(jié)果說(shuō)明分離自青海野生動(dòng)物的H7N2病毒是源于禽類(lèi)、不易感

7、染哺乳動(dòng)物且對(duì)金剛烷胺敏感的流感病毒。
　　 通過(guò)對(duì)來(lái)自鼠的A/Mouse/Niaodao/0601/06(MND1)、鼠兔的A/Pika/Xingxinghai/0601/06(PXXH1)和A/Pika/Garila/0601/06(Pgarila)3株H7N2病毒對(duì)雞和小鼠的致病性分析，結(jié)果表明，3株H7N2病毒對(duì)雞的。IVPI均低于1.2，雞在感染病毒后未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，病毒局限在感染雞的呼吸道和消化道復(fù)制；小鼠在感