2株豬源H9N2亞型流感病毒的分離鑒定及對(duì)小鼠致病性的研究.pdf

1、流感病毒現(xiàn)已遍布世界各地，因豬的種間屏障較低，易形成“人-豬-禽”的傳播鏈，并在此期間發(fā)生基因重配，產(chǎn)生新的基因型，威脅公共衛(wèi)生安全。
　　本研究通過(guò)應(yīng)用RT-PCR和雞胚接種的方法，對(duì)2011年從廣西百色市樂業(yè)縣豬場(chǎng)中分離到的2株H9N2亞型流感病毒進(jìn)行了生物學(xué)特性、分子遺傳規(guī)律、對(duì)小鼠的致病性等方面的研究。根據(jù)在NCBI上BLAST的結(jié)果確定這2株分離株為H9N2亞型流感病毒，本實(shí)驗(yàn)室參考國(guó)際命名規(guī)則進(jìn)行，簡(jiǎn)稱為SW/GX/P

2、2/2011和SW/GX/P3/2011。其中，PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的核苷酸ORF分別為2280bp、2274bp、2151bp、1683bp、1497bp、1410bp、982bp和838bp。這2株分離株與近年來(lái)廣西分離株A/Canine/Guangxi/1/2011和A/Equine/Guangxi/3/2011的核苷酸及氨基酸同源性都在99.0％以上。
　　根據(jù)獲得的氨基酸序列分析，2株分離株的

3、HA蛋白上第109、161、163、202和203位均高度保守，第234位為亮氨酸L，具有SAα-2，6Gal受體結(jié)合特異性，HA裂解位點(diǎn)為-RSSRGLF-，沒有多個(gè)氨基酸插入，屬于低致病性毒株;NA蛋白的第63～65位無(wú)缺失，而有的研究認(rèn)為這3個(gè)氨基酸的缺失對(duì)于增加病毒的神經(jīng)氨酸酶活性有幫助，同時(shí)也有利于病毒從被感染細(xì)胞中釋放，其次NA在119、151、276、292以及294等位點(diǎn)沒有發(fā)生變異，說(shuō)明SW/GX/P2/2011和SW

4、/GX/P3/2011分離株仍對(duì)神經(jīng)氨酸酶類藥物敏感;M2蛋白上的第31位發(fā)生了由S→N的突變，表明這兩株毒對(duì)金剛烷胺類藥物產(chǎn)生耐藥性;在內(nèi)部基因中，與致病力有關(guān)的基因位點(diǎn)PB2的627、701位，PB1的622、709位，PA的315、515位，NS的92位以及NP的319位與參考毒株相比均保守。通過(guò)2株分離株分子進(jìn)化樹和同源性分析顯示，HA來(lái)源于Y280-like亞系，NA來(lái)源于G9-like亞系，M和PB2來(lái)源于G1-like亞系

5、，PB1、PA、NS和NP來(lái)源于F98-like亞系。
　　對(duì)這2株進(jìn)行雞胚半數(shù)感染量(EID50)試驗(yàn)得出SW/GX/P2/2011和SW/GX/P3/2011的其LgEID50/0.1mL分別為5.02以及5.23。小鼠致病性結(jié)果顯示，小鼠出現(xiàn)了以肺臟為主的病理變化，病毒能夠在肺臟以及鼻甲中復(fù)制，但復(fù)制水平有一定差異，上呼吸道的鼻甲的復(fù)制能力比下呼吸道的肺臟高。2個(gè)毒株最低均可使小鼠體重下降6％，但并未能致死小鼠，之后至第8天