山東省大白菜軟腐病菌優(yōu)勢種群的篩選及抗病基因的AFLP標記.pdf

1、大白菜(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)原產(chǎn)于中國,在亞洲,特別是在東亞地區(qū)已經(jīng)成為主要蔬菜之一。近幾年來,隨著保護地栽培技術的發(fā)展和反季節(jié)大白菜品種的育成應用,菜地連作現(xiàn)象普遍,致使大白菜“三大病害”之一的軟腐病發(fā)生與發(fā)展呈現(xiàn)上升趨勢,對大白菜的豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)構成很大威脅。大白菜軟腐病的病原菌主要為胡蘿卜軟腐歐文氏菌(Erwinia carotovora),常為幾個不同的菌株復合侵染,其中胡蘿卜軟腐亞種(Erw

2、inia.carotovora subsp.carotovora,Ecc)是主要的致病類型。目前,抗軟腐病已經(jīng)成為大白菜抗病育種的重要目標,在傳統(tǒng)的育種材料篩選過程中,程序繁瑣,周期長,且易受環(huán)境影響,因此通過篩選出的優(yōu)勢致病菌類型,接種鑒定選擇具有代表性的抗、感材料,進而尋找與抗軟腐病基因緊密連鎖的分子標記,對于迅速、方便的進行種質(zhì)資源的抗病性鑒定,加速大白菜抗病育種進程具有重要意義。 本實驗通過篩選出的大白菜軟腐病菌Ecc優(yōu)

3、勢致病力類型,經(jīng)田間和室內(nèi)接種鑒定得到抗病材料683和感病材料1042。以683和1042的雜交后代構建F2代分離群體,用同一菌株對F2代的各單株進行人工接種抗性鑒定。采用BSA法選取極端抗病和極端感病的單株,分別構建三對抗感基因池,結合AFLP分子標記技術篩選與大白菜抗軟腐病基因緊密連鎖的分子標記,主要結果如下： 1、2005～2006年在山東省濟南、青島、濰坊、煙臺、德州、臨沂等市轄地區(qū)的大白菜生產(chǎn)田,采集病株標樣60份。分

4、離、純化后經(jīng)致病性測定獲得致病菌株143個。 2、143個致病菌株經(jīng)形態(tài)學、生理生化特性等鑒定表明,山東省大白菜軟腐歐文氏菌存在四種類型,分屬于胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜軟腐亞種Erwinia.carotovora subsp.carotovora(Ecc)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌黑脛亞種E.carotovora subsp.atroseptica(Eca)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌山葵亞種E.carotovora subsp.wasabi

5、ae(ECW)和菊歐文氏菌Erwinia.chrysantherni(Ech)。田間出現(xiàn)的頻率分別為70％、11.1％、0.6％和19.3％,以Ecc為優(yōu)勢種群。 3、以優(yōu)勢致病力菌株Ecc對親本683、1042及其雜交F2群體的242個單株進行抗軟腐病鑒定,其中抗病單株58株,感病單株184株,抗感比為1:3.17,基本符合1:3的分離比,即該遺傳群體中對軟腐病的抗性受主效單基因隱性控制。 4、利用AFLP分子標記技術