大白菜抗蕪菁花葉病毒(TuMV)基因分子標(biāo)記篩選與定位.pdf

1、Identificationofmolecularmarkersandmappingforturnipmosaicvirus(TuMV)resistantgeneinChinesecabbage(BrassicarapaLssppekinensis)ThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfifImentoftheRequirementfortheDegreeof—Maste

2、rofScienceZhangXiaoLiang(DepartmentofLifeScience)Supervisor：SongXiyunLiQiaoyunQngdaoChinaMay2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要大白菜抗蕪菁花葉病毒(TuMV)基因分子標(biāo)記篩選與定位摘要大白菜f，BrassicarapaLssppekinensis，從，2n=20)是十字花科蕓薹屬植物，原產(chǎn)于我國(guó)，是我國(guó)乃至整個(gè)東亞地區(qū)的重要蔬菜。病毒病是我國(guó)大

3、白菜的三大病害之一，研究表明，浸染我國(guó)大白菜的主要病原是蕪菁花葉病毒病(Tumipmosaicvirus，簡(jiǎn)稱(chēng)TuMV)，占病毒分離物的719％。傳統(tǒng)的育種方法周期長(zhǎng)，效率低，而且由于基因間的互作以及外界環(huán)境條件等因素的影響，選擇的準(zhǔn)確性差。利用分子標(biāo)記輔助選擇的方法創(chuàng)新種質(zhì)，可大大加快育種進(jìn)程，具有準(zhǔn)確、可靠、高效等優(yōu)點(diǎn)，正在成為現(xiàn)代育種的一種發(fā)展趨勢(shì)。篩選大白菜TuMV抗性基因分子標(biāo)記及對(duì)有關(guān)基因進(jìn)行定位，可為大白菜抗TuMV的分子

4、標(biāo)記輔助選擇奠定基礎(chǔ)。本研究選用國(guó)家級(jí)大白菜TuMV抗原材料8407(P】)和感TuMV的大白菜核心種質(zhì)材料冠291if2)為親本，分別構(gòu)建了其Fz(P1xP2)、B1(Flxpl)、B2(Flxp2)和F2研究群體，并對(duì)上述親本和群體進(jìn)行TuMV接種和鑒定，分析其抗性遺傳規(guī)律。利用108株B2群體為研究對(duì)象，采用分離群體分組分析法(BulkedSegregationAnalysis，BSA)，結(jié)合表達(dá)序列標(biāo)簽SSR(Experssed

5、SequenceTagsSSR，ESTSSR)標(biāo)記技術(shù)，對(duì)大白菜TuMV抗性基因進(jìn)行了標(biāo)記和定位，主要結(jié)果如下：1分別對(duì)親本、F1、Bl、B2和F2群體接種TuMVC4，通過(guò)三次調(diào)查獲得各單株的抗、感數(shù)據(jù)，結(jié)果表明，F(xiàn)1代和B1代的病情指數(shù)分別為1167和2081，均為抗病；B2群體中抗病單株(47)和感病單株(61)符合1：1的分離比例(#=181#005)，F(xiàn)2群體中抗病單株(365)和感病單株(144)符合3：1的分離比例(Z=2

6、94Zo_05)，表明在該群體中TuMV抗性由一對(duì)顯性基因控制，命名為T(mén)uRBCS01。2對(duì)大白菜及蕓薹屬中與抗性有關(guān)的EST序列進(jìn)行了搜索和SSR篩選，并根據(jù)SSR兩端的序列設(shè)計(jì)引物，以?xún)捎H本基因組DNA為模板，進(jìn)行了PCR擴(kuò)增篩選。結(jié)果表明，在137條大白菜EST和895條蕓薹屬抗性EST序列中，共篩選出168個(gè)符合條件的SSR(163％)。其中包含6種核苷酸重復(fù)基元，占主導(dǎo)地位的分別是二核苷酸重復(fù)(333％)和三核苷酸重復(fù)(506