硬骨魚類紅細(xì)胞免疫功能研究.pdf

1、自從Siegel等首次提出“紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)”的概念以來，對紅細(xì)胞免疫研究取得了長足進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物紅細(xì)胞除運(yùn)輸氧氣、二氧化碳，以及調(diào)節(jié)pH等功能外，還具有免疫功能。在哺乳動物紅細(xì)胞表面存在眾多免疫相關(guān)分子，它們具有粘附和濃縮抗原、清除免疫復(fù)合物、促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬、增強(qiáng)NK(naturalkiller，NK)細(xì)胞活性以及參與和指導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答等免疫功能。已有的大量研究顯示，紅細(xì)胞免疫在機(jī)體免疫防御體系中具有舉足輕重的作用。

2、>　　 硬骨魚類的免疫功能和哺乳動物類似，但其獲得性免疫防御體系尚不完善。免疫球蛋白種類少(主要是IgD和IgM)且產(chǎn)生周期長，提示天然免疫防御體系在其免疫防御中可能占有更重要的地位。魚類紅細(xì)胞分化程度低，尚具有細(xì)胞核，可能更多保存了類似白細(xì)胞的免疫防御功能；同時，紅細(xì)胞數(shù)量眾多，在外周血中是白細(xì)胞的500～1000倍。因此，對魚類紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)的深入研究，將對全面客觀了解魚類免疫防御系統(tǒng)具有重要的理論意義和實(shí)踐應(yīng)用價(jià)值。但目前對于硬

3、骨魚類的紅細(xì)胞免疫功能還缺乏系統(tǒng)的比較研究。
　　 一方面，該研究以草魚(Ctenopharyngodon idellus)、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)和尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)為研究對象，采用經(jīng)典的紅細(xì)胞C3b受體(erythrocyte C3b receptors，E-C3bR)與紅細(xì)胞免疫復(fù)合物(erythrocyte immunecomplexes，E-IC)花環(huán)實(shí)

4、驗(yàn)，檢測不同種類硬骨魚的紅細(xì)胞在全血體系與洗滌紅細(xì)胞體系下的E-C3bR與E-IC粘附率，同時檢測自身未滅活血清與滅活血清(58℃處理30 min)對洗滌紅細(xì)胞免疫粘附功能的調(diào)控作用。
　　 結(jié)果顯示，在全血體系條件下，草魚、斑點(diǎn)叉尾鮰和尼羅羅非魚的E-C3bR與E-IC粘附率均顯著高于洗滌紅細(xì)胞體系條件下生理鹽水組的E-C3bR與E-IC粘附率(P<0.05)。提示全血反應(yīng)體系中存在對紅細(xì)胞免疫粘附功能具有正向調(diào)控作用的因子。

5、另一方面，滅活血清組處理的紅細(xì)胞E-C3bR粘附率與E-IC粘附率均顯著高于未滅活血清組及生理鹽水組(P<0.05)。提示硬骨魚類血清中普遍存在熱不穩(wěn)定的抑制因子和熱穩(wěn)定的促進(jìn)因子。
　　 另一方面，經(jīng)典的紅細(xì)胞免疫粘附功能檢測方法是通過光學(xué)顯微鏡觀察，平板計(jì)數(shù)，獲得其C3b受體及其免疫復(fù)合物粘附率。該方法不僅費(fèi)時、費(fèi)力，而且不同操作人員之間誤差較大。流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)是一項(xiàng)可以快速、準(zhǔn)確、高通量檢測單個微粒等多項(xiàng)特性，并加以定

6、量的技術(shù)，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域。基于此，該研究首先通過制備熒光標(biāo)記的酵母，探討流式細(xì)胞儀檢測魚類紅細(xì)胞免疫粘附功能的可行性。結(jié)果顯示，草魚紅細(xì)胞E-C3bR與E-IC粘附率滅活血清組(分別為40.16％和20.65％)明顯高于未滅活血清組(分別為3.1，6％和6.75％)與生理鹽水組(分別為10.87％和27.00％)；未滅活血清組明顯低于生理鹽水組。該研究結(jié)果與光鏡的觀察結(jié)果基本吻合。從而表明，流式細(xì)胞儀可以作為紅細(xì)胞