羊棲菜多糖對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫功能【畢業(yè)論文】

1、<p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）</p><p>　　論文題目：羊棲菜多糖對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫功能</p><p><b>　　的影響</b></p><p>　　所在學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物技術(shù) </p>

2、<p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 日</p><p>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠信承諾書</p><p>　　1．本人承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)

3、計(jì)），是在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下嚴(yán)格按照學(xué)校和學(xué)院有關(guān)規(guī)定完成的，引用他人的觀點(diǎn)和參考資料均加以注釋和說明。</p><p>　　2．本人鄭重地承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）沒有抄襲他人研究（設(shè)計(jì)）成果和偽造相關(guān)數(shù)據(jù)等行為。</p><p>　　3．畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）若有侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。</p><p>　　學(xué)生簽名： __________&

4、lt;/p><p>　　日 期： _________ </p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　羊棲菜多糖（Sargassum fusiforme polysaccharides，SFPS）具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗氧化、抗凝血、降血脂、降血糖和促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的作用。試驗(yàn)應(yīng)用環(huán)磷酰胺藥物（CY）制作小鼠免疫抑

5、制模型，探討羊棲菜多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響。主要試驗(yàn)方法是紅細(xì)胞花環(huán)試驗(yàn)測(cè)定小鼠紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率（E-C3bR）及免疫復(fù)臺(tái)物花環(huán)率（E-ICR），MTT法測(cè)植物血凝素誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)以及小鼠的免疫器官指數(shù)的測(cè)定。試驗(yàn)主要目的是揭示羊棲菜多糖對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響。</p><p>　　試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給藥后小鼠脾臟指數(shù)明顯上升，胸腺指數(shù)也有提高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，給藥組的脾臟指數(shù)與對(duì)照組比較有顯著

6、性差異，羊棲菜多糖對(duì)小鼠免疫功能影響顯著。羊棲菜多糖可明顯促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)（P<0.05）。試驗(yàn)結(jié)果初步表明，羊棲菜多糖對(duì)小鼠具有一定的免疫促進(jìn)作用。</p><p>　　關(guān)鍵詞：羊棲菜多糖；花環(huán)率；脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)；紅細(xì)胞免疫</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　The S

7、FPS can regulate the immune function, antitumor, anti-oxidation, anticoagulant, reducing blood fat, fall blood sugar and the body to promote the growth of the role. The immunosuppression mice model were established by us

8、ing medicine of cyclophosphamide. Experimental study the immune functions influence of the sargassum fusiforme on the mice through the red blood cells wreath test C3b red blood cell receptor wreath rate and immune comple

9、x sets things wreath rate, and the MTT method plant hem</p><p>　　The experimental results showed that the drug mice, the spleen index increased obviously, the thymus index has also been increased. After stat

10、istics processing showed that the spleen treatment group and control group was significant difference, The SFPS significant effect on immunological function of mice. The SFPS could significantly promote the mice induced

11、ConA spleen T lymphocyte proliferation reverse(P<0.05). Test results preliminary showed that, the SFPS have certain immune stimulative eff</p><p>　　Key words: SFPS; wreath rate; value-added reaction; sple

12、nic lymphocytes; red blood cells</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p>　　1.1 研究背景1</p><p>　　1.2 藻類多糖的免疫作用1</p><p>　　

13、1.3 多糖的紅細(xì)胞免疫作用2</p><p><b>　　2 材料與方法2</b></p><p><b>　　2.1 材料2</b></p><p>　　2.1.1 主要試劑2</p><p>　　2.1.2 主要玻璃器皿及其它材料3</p><p>　　2.1

14、.3 其他試劑配制4</p><p>　　2.2 試驗(yàn)方法5</p><p>　　2.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧5</p><p>　　2.2.2 紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率及免疫復(fù)臺(tái)物花環(huán)率的測(cè)定5</p><p>　　2.2.3 免疫器官指數(shù)測(cè)定6</p><p>　　2.2.4 植物血凝素誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反

15、應(yīng)6</p><p>　　2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)6</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析6</b></p><p>　　3.1 試驗(yàn)小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)觀察6</p><p>　　3.2 SFPS對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響7</p><p>　　3.2.1 對(duì)紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)率（E2C3bR

16、R）的影響7</p><p>　　3.2.2 對(duì)紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（E2CIR）的影響7</p><p>　　3.3 SFPS對(duì)小鼠免疫器官的影響8</p><p>　　3.4 SFPS對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響9</p><p><b>　　4 討論9</b></p><p>　　

17、4.1 海藻多糖與紅細(xì)胞免疫9</p><p>　　4.2 羊棲菜多糖的免疫活性10</p><p>　　4.3 羊棲菜多糖作為保健藥物的開發(fā)前景11</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)12</b></p><p><b>　　致 謝14</b></p><p>

18、;<b>　　1 前言</b></p><p><b>　　1.1 研究背景</b></p><p>　　在我國(guó)海藻資源豐富中，羊棲菜（Sargassum fusiforme）屬褐藻門馬尾藻科，又名玉茜、胡須泡、海大麥、海菜芽、鹿角尖、海藻、落首，為多年生大型海藻，在我國(guó)沿海城市遼寧、福建、浙江、山東、廣東均有生長(zhǎng)，還分布于日本和朝鮮沿海[1]。

19、羊棲菜在《本革綱本》草部水草類海草條中記有軟堅(jiān)散結(jié)、利水泄熱等功效。羊棲菜在民間早已入藥，“全藻軟堅(jiān)散結(jié)、消痰、清涼解毒、破血祛瘀、利水消腫”，用于治療癭瘤、瘰疬、睪丸腫痛、痰軟水腫等。目前證實(shí)，羊棲菜富含多糖、蛋白和多種對(duì)人體有益的微量元素。羊棲菜提取物，尤其是羊棲菜多糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗氧化、抗凝血、降血脂、降血糖和促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的作用[2]。</p><p>　　羊棲菜多糖（Sargassu

20、m fusiforme polysaccharides，SFPS）是從馬尾藻科植物羊棲菜全藻中提取分離到的多糖。多糖碳水化合物（總糖）是海藻的主體成分，占干重的20%~70%，多糖為其主要組成部分。它是從全藻中提取到的一種水溶性多糖，包括褐藻酸（alginic acid）、褐藻多糖硫酸酯（fucoidan，F(xiàn)CD）及褐藻淀粉（laminaran）。褐藻酸主要是以β-1，4鍵相結(jié)合的D-甘露糖醛酸聚合物，在羊棲菜中含量較高，占20.8%[

21、3]。褐藻多糖硫酸酯主要由L-巖藻糖和硫酸根組成，其含量較少，一般在0.5%~10%之間[2, 3]。季宇彬等[4]采用HPCE法分析羊棲菜多糖主要由甘露糖、果糖、巖藻糖和半乳糖組成，還含有微量的鼠李糖、木糖和葡萄糖。</p><p>　　1.2 藻類多糖的免疫作用</p><p>　　多糖作為抗腫瘤藥物的增敏劑和功能性食品毒副作用小，在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域有具有廣闊的應(yīng)用前景。對(duì)羊棲菜多糖的進(jìn)

22、一步研究必將成為進(jìn)一步利用羊棲菜多糖開發(fā)研制新藥及食品提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)提高我國(guó)海洋資源的利用率。羊棲菜多糖對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異性免疫均起著不同程度的增強(qiáng)作用。它不僅可以激活T細(xì)胞、B細(xì)胞、Mφ、LAK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)IL-l、TNF、H2O2、NO、C3等效應(yīng)因子的形成，還可抑制紅細(xì)胞膜上Na+、K+-ATPase活性，發(fā)揮強(qiáng)大的免疫網(wǎng)絡(luò)功能。調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)的重要活性的細(xì)胞有，T細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞。這些細(xì)

23、胞可通過細(xì)胞毒作用、吞噬作用抑制和殺傷靶細(xì)胞。所以要確定機(jī)體的免疫現(xiàn)狀，可以通過測(cè)定ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、NK細(xì)胞殺傷活性及腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性。季字彬等[4]報(bào)道，羊棲菜多糖能降低小鼠紅細(xì)胞膜過氧化脂質(zhì)（LPO）含量，抑制紅細(xì)胞膜蛋白與收縮蛋白交聯(lián)高聚物（HMP）的形成，并能增加紅細(xì)胞膜封閉區(qū)及唾液酸的含量，增強(qiáng)紅細(xì)胞膜超氧化物歧化酶（SOD)、過氧化氫酶（CAT）等的活性，提高小鼠紅細(xì)胞的免疫功能。嚴(yán)全能[5]等的研究發(fā)現(xiàn)

24、，SPFS明顯刺</p><p>　　1.3 多糖的紅細(xì)胞免疫作用</p><p>　　近年來的諸多研究表明，許多中藥多糖能夠促進(jìn)機(jī)體的紅細(xì)胞免疫功能。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪、靈芝、茯苓、當(dāng)歸、黨參、天花粉等中藥多糖在體外能調(diào)節(jié)紅細(xì)胞膜的C3b受體活性，增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能[6]。云芝多糖對(duì)輻射損傷的紅細(xì)胞免疫功能有明顯的保護(hù)作用，能使紅細(xì)胞免疫粘附功能得到恢復(fù)和增強(qiáng)[7]。黃芪多糖在體外可直接作用

25、于紅細(xì)胞，使癌癥患者的紅細(xì)胞C3b受體活性和免疫粘附腫瘤細(xì)胞的能力增強(qiáng)[8]；體內(nèi)對(duì)荷瘤S180小鼠的紅細(xì)胞免疫粘附作用也有明顯的增強(qiáng)作用[9]。高學(xué)軍等[10-12]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖和香菇多糖對(duì)vMDV感染雛雞和正常雛雞的的紅細(xì)胞免疫功能均有增強(qiáng)作用，可引起雛雞繼發(fā)性紅細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)。豬苓多糖也被證明有增強(qiáng)荷瘤S180小鼠紅細(xì)胞CR1活性的作用,增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能[13]。</p><p>　　基于諸多前人

26、研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)利用前期分離純化獲得的羊棲菜多糖（SFPS），通過免疫抑制小鼠模型的建立，并對(duì)小鼠血液紅細(xì)胞花環(huán)率的檢測(cè)來研究羊棲菜多糖對(duì)免疫抑制小鼠紅細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用，探討SFPS對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫的影響。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 材料</b></p><

27、;p>　　2.1.1 主要試劑</p><p><b>　　表1 主要試劑</b></p><p><b>　　續(xù)表1</b></p><p>　　2.1.2 主要玻璃器皿及其它材料</p><p>　　三角瓶（500mL、250mL）、燒杯（1000mL）、容量瓶（1000mL、500mL、

28、50mL）、滴管（帶橡皮頭）、吸量管（1mL、2mL、5mL、10mL）、試劑瓶（1000mL、500mL、50mL）、量筒（50mL）、酒精燈、洗瓶、玻璃棒、洗衣粉、毛刷、洗耳球、濾紙、解剖刀（刀柄、刀片）、鑷子、不銹鋼藥勺、塑料培養(yǎng)瓶、封口膜、保鮮膜、報(bào)紙、棉塞、脫脂棉、綁瓶的繩子、稱量紙、濾紙、pH試紙、標(biāo)簽紙、火柴、剪刀、口罩、離心管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板、96孔培養(yǎng)板。</p><p&g

29、t;　　表2 主要儀器和設(shè)備</p><p>　　2.1.3 其他試劑配制</p><p>　?。?）無菌水制備：用洗衣粉清洗500mL儲(chǔ)液瓶，晾干后裝入蒸餾水，用報(bào)紙包緊瓶塞，在121℃下高壓滅菌20min備用。</p><p>　?。?）1mol/L氫氧化鈉：用小燒杯稱取片狀氫氧化鈉固體2g，加適量的蒸餾水溶解，用50mL容量瓶定容后，放在試劑瓶?jī)?nèi)備用。<

30、/p><p>　?。?）75%酒精：95%的醫(yī)用酒精以8/2比例用蒸餾水稀釋，將80mL95%的醫(yī)用酒精用蒸餾水定容到100mL，置于試劑瓶?jī)?nèi)備用。</p><p>　　（4）生理鹽水的配置：取9g氯化鈉，加入到991mL的蒸餾水中混勻，高壓滅菌后，備用。</p><p>　　（5）PBS液：將磷酸二氫鉀0.27g，磷酸二氫鈉1.42g，氯化鈉8g，氯化鉀0.2g加到約

31、800 mL去離子水中，充分?jǐn)嚢枞芙?，然后加入濃鹽酸調(diào)pH至7.4，最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫保存。</p><p>　?。?）Hanks液：甲液：二水磷酸二氫鈉0.06g，磷酸二氫鉀0.06g，七水硫酸鎂0.20g，葡萄糖1.00g，氯化鈉8.00g，加三蒸水750mL。乙液：氯化鈣0.14 g加三蒸水100mL。將乙液加入到甲液中。將0.35g碳酸氫鈉溶解在37℃100mL三蒸水中，用數(shù)滴碳酸氫鈉液溶

32、解0.02g酚紅，移入甲乙混合液中，用三蒸水定容至1000mL。充分混勻，4℃冰箱過夜。慮過消毒，小瓶分裝，冷藏。</p><p>　?。?）5mg/mLMTT：稱取0.5gMTT，溶于100mL的磷酸緩沖液（PBS）中，用0.22μm濾膜過濾以出去溶液里的細(xì)菌，放4℃避光保存即可。</p><p>　　（8）RPMI1640培養(yǎng)液：取RPMI1640粉劑一包溶于1000mL雙蒸水中，通入

33、CO2中，用NaHCO3調(diào)pH至7.2，加谷氨酰胺30g/L，過濾滅菌、分裝。用前加入含小牛血清10%、青霉素1萬u/mL、鏈霉素1萬u/mL。</p><p>　?。?）C3bR致敏酵母懸液：將酵母試劑用Hanks液洗1次（1000r/min×10 min），配成含1×108酵母細(xì)胞/mL的懸液，然后加等量新鮮豚鼠血清，混勻，37℃水浴20min，然后再以Hanks液洗2次，恢復(fù)原濃度，即為

34、C3b致敏酵母細(xì)胞懸液。酵母試劑用Hanks液稀釋成1.25×108/mL濃度，即為非致敏酵母細(xì)胞懸液。</p><p>　?。?0）紅細(xì)胞懸液制備：將小鼠的肝素抗凝血用Hanks液洗3次（每次以2000 r/min×5 min），最后將紅細(xì)胞用Hanks液稀釋成1.25×107細(xì)胞/mL的懸液。</p><p>　?。?1）脾細(xì)胞懸液的制備：無菌取脾，用無菌

35、Hanks液漂洗后，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，剪碎脾臟，制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過濾，濾液1000rpm離心5min，棄上清，細(xì)胞漿加入0.5mL滅菌蒸餾水，裂解紅細(xì)胞30s后，加入0.5mLHanks液，1000rpm離心5min，棄上清，沉淀用1mLRPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮。完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/mL。</p><p><b>　　2.2 試驗(yàn)方法<

36、;/b></p><p>　　2.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧</p><p>　　小鼠購自寧波大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，養(yǎng)殖試驗(yàn)自2011年6月14號(hào)至2011年6月29號(hào)在浙江省重中之重學(xué)科實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。</p><p>　　試驗(yàn)采用純種ICR品系小鼠48只，8周大小，體重20g左右，雌雄各半。隨即分為4組，每組12只，雌6雄6，各置于同只籠子里飼養(yǎng)。小鼠飼養(yǎng)室相關(guān)指標(biāo)為

37、：室溫22±1C，濕度50-60%，光照150-200Lx，12h明暗交替，噪音<50dB，屏障系統(tǒng)溫度、濕度、光照、壓力梯度等設(shè)有自動(dòng)控制和顯示系統(tǒng)。自由飲食，小鼠飼養(yǎng)籠中給予充足的飼料和水，每籠飼養(yǎng)6只，試驗(yàn)前每只小鼠稱重并標(biāo)記編號(hào)。小鼠分為4組，分別為，正常對(duì)照組（CK），羊棲菜多糖組（SFP），免疫抑制組（CY），免疫抑制＋羊棲菜多糖組（CY+SFP）。</p><p>　　正常對(duì)照組（C

38、K）：用生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)15天。</p><p>　　羊棲菜多糖組（SFP）：灌胃給藥，劑量為200mg/kg，每日1次，連續(xù)15天。</p><p>　　免疫抑制組（CY）：腹腔注射環(huán)磷酰胺1次，劑量為150mg/kg。之后，灌胃給與生理鹽水，每日1次，連續(xù)15天。</p><p>　　免疫抑制＋羊棲菜多糖組（CY+SFP）：腹腔注射環(huán)磷酰胺1次，劑量

39、為150mg/kg。之后，灌胃給與羊棲菜多糖，劑量為200mg/kg，每日1次，連續(xù)15天。</p><p>　　給藥體積為0.2mL，SFP溶解時(shí)用生理鹽水配制。給藥24h后，所有動(dòng)物稱重，宰殺，立即分離心、肝、脾、腎和胸腺，肝、脾和胸腺需立即稱重。肝臟稱重完立即置于液氮里速凍。</p><p>　　2.2.2 紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率及免疫復(fù)臺(tái)物花環(huán)率的測(cè)定</p><

40、;p>　　取兩支試管，每管加待測(cè)RBC使用液0.075mL，第一管再加補(bǔ)體致敏酵母多糖使用液0.075mL，第二管再加酵母多糖使用液0.075mL，都搖勻放37℃水浴30min，取出用手腕輕輕搖勻，加生理鹽水0.15mL混勻后再加0.25%戊二醛0.05mL輕輕混勻；取1/3量水平涂片、吹于、加甲醇固定；加少許瑞氏液，再加瑞氏緩沖液（pH6.4），用鹽水或自來水少許沖洗；加鹽水后高倍顯微鏡計(jì)數(shù)。一個(gè)紅細(xì)胞結(jié)上2個(gè)或以上酵母菌為一朵

41、花環(huán)。計(jì)數(shù)200個(gè)RBC，算出百分率。第一管為RBC-C3b受體花環(huán)率，第二管為RBC-IC花環(huán)率[14]。</p><p>　　2.2.3 免疫器官指數(shù)測(cè)定</p><p>　　各組在末次給藥后24h后稱重，脫頸椎處死小鼠，稱體重，剝?nèi)「闻K、胸腺和脾臟，并將周圍組織剝離干凈后稱重，計(jì)算免疫臟器指數(shù)：胸腺指數(shù)＝胸腺平均重量（mg）/平均體重（g），脾臟指數(shù)=脾臟平均重量（mg）/平均體重（

42、g）。</p><p>　　2.2.4 植物血凝素誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)</p><p>　　取脾淋巴細(xì)胞懸液0.5mL加入兩孔24孔培養(yǎng)板中，分別為實(shí)驗(yàn)孔和對(duì)照孔，再在實(shí)驗(yàn)孔中加300μg/mL的植物血凝素0.5mL，對(duì)照孔加完全培養(yǎng)基0.5mL，混勻后置37℃、5%CO2孵育72小時(shí)。</p><p>　　培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，每孔輕輕吸上清液700μL，加入70

43、0μL不含豚鼠血清的1640培養(yǎng)液，MTT（5mg/mL）50μL/孔，混勻后繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，每孔加1mL的鹽酸異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，然后分裝96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔做3個(gè)平行孔，置酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)為570nm測(cè)定OD值。</p><p>　　每孔加入100μL酸性異丙醇，震蕩混勻，于5%CO2培養(yǎng)箱放置過夜，用酶標(biāo)儀在570nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔光密度值。各動(dòng)物實(shí)驗(yàn)孔和陰性對(duì)照孔三孔平均吸光度值得差值作為增

44、殖指數(shù)[15]。</p><p>　　2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)</p><p>　　本論文數(shù)據(jù)經(jīng)Excel初步處理后，采用SAS（1999）廣義線性模型（GLM）的單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)，各平均數(shù)之間用Duncan法進(jìn)行多重比較。不同組間P<0.05視為差異顯著，P<0.01視為差異極顯著，0.05<P<0.1視為有改變趨勢(shì)[17]。</p>

45、<p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 試驗(yàn)小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)觀察</p><p>　　試驗(yàn)中，我們對(duì)小鼠的生長(zhǎng)狀況跟蹤觀察。小鼠飼養(yǎng)期間大部分小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)良好，體溫正常，體重增加，有精力，毛皮有光澤，眼睛明亮（如圖1所示）。圖中體標(biāo)黃色為小鼠分組標(biāo)志。</p><p>　　圖11 小鼠生長(zhǎng)狀況（體標(biāo)

46、黃色為小鼠分組標(biāo)志）</p><p>　　3.2 SFPS對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響</p><p>　　3.2.1 對(duì)紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)率（E2C3bRR）的影響</p><p>　　SFPS對(duì)紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)率影響顯著（如圖2所示），飼喂羊棲菜多糖后，正常小鼠血液紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率（E2C3bRR）與對(duì)照組（CK）相比，顯著升高（P<0.05），但免疫抑制小

47、鼠（CY）的C3b受體花環(huán)率（E2C3bRR）沒有明顯差異（P<0.05）。說明羊棲菜多糖對(duì)紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)率的影響顯著。</p><p>　　圖22 羊棲菜多糖對(duì)紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)率的影響</p><p>　　3.2.2 對(duì)紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（E2CIR）的影響</p><p>　　SFPS對(duì)小鼠紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率的影響不明顯（如圖3所示），飼喂羊棲菜多糖

48、后，各組小鼠血液紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（E2-CIR）之間均無顯著差異（P<0.05），說明羊SFPS對(duì)紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率的影響不明顯。</p><p>　　圖33 羊棲菜多糖對(duì)紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率的影響</p><p>　　3.3 SFPS對(duì)小鼠免疫器官的影響</p><p>　　SFPS對(duì)小鼠胸腺指數(shù)影響顯著（如圖4，5所示），本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示給藥S

49、FPS后小鼠胸腺指數(shù)明顯上升，脾臟指數(shù)也有提高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示SFPS給藥組的脾臟與對(duì)照組比較有顯著性差異，SFPS給藥組對(duì)小鼠免疫功能影響最顯著。</p><p>　　圖44 羊棲菜多糖對(duì)小鼠胸腺指數(shù)的影響</p><p>　　圖55 羊棲菜多糖對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的影響</p><p>　　3.4 SFPS對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響</p><p

50、>　　SFPS對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響顯著（如圖6所示），SFPS可明顯促進(jìn)植物血凝素誘導(dǎo)的小鼠脾T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)（P<0.05）。CY組的植物血凝素誘導(dǎo)的小鼠脾T淋巴細(xì)胞增值反應(yīng)則低于CK組（P<0.05）。說明對(duì)于植物血凝素誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，CY組與CK組相比，起抑制作用，而SFPS能夠?qū)弓h(huán)磷酰胺對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用。</p><p>　　圖66 羊棲菜多糖對(duì)小鼠脾淋

51、巴細(xì)胞增殖的影響</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　4.1 海藻多糖與紅細(xì)胞免疫</p><p>　　海藻是海洋植物中數(shù)量和品種最多的一類，海洋中生長(zhǎng)有15000余種海藻。海藻主要可以分為褐藻、紅藻、藍(lán)藻、綠藻等。其最重要的產(chǎn)物就是多糖，約占干重的50%以上[18]。多糖廣泛存在于自然界中的動(dòng)物、植物、微生物和海

52、洋生物等機(jī)體內(nèi)，既是生物體的貯能物質(zhì)，也是生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，還參與多種重要的生命活動(dòng)。目前為止，國(guó)內(nèi)外已從各種海藻中分離提取得到多種多糖，其中就包括有羊棲菜多糖。研究表明，多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗輻射、抗菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗感染、抗氧化、抗疲勞、抗突變、抗風(fēng)濕、抗凝血、抗菌消炎、降血脂、降血壓、降血糖、延緩衰老及防治心腦血管疾病等多種生理藥理作用[24]。大量研究表明海藻多糖是通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能發(fā)揮這些作用的。本試驗(yàn)針對(duì)羊

53、棲菜多糖的在紅細(xì)胞免疫方面的作用進(jìn)行展開，通過試驗(yàn)得出羊棲菜多糖確實(shí)有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的作用。</p><p>　　4.2 羊棲菜多糖的免疫活性</p><p>　　通過研究表明，羊棲菜多糖對(duì)小鼠具有一定的免疫促進(jìn)作用，可促進(jìn)ConA 誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞轉(zhuǎn)化[22]。王揚(yáng)等[23]采用DEAESephadex A-25柱凝膠柱層析法從羊棲菜提取物分離獲得得率較高的羊棲菜組分f1、f1對(duì)小鼠抗sRB

54、C抗體生成有促進(jìn)作用，同時(shí)明顯提高小鼠脾指數(shù)，f1對(duì)小鼠胸腺T淋巴細(xì)胞增殖促進(jìn)作用呈明顯量效關(guān)系。季宇彬等[24]發(fā)現(xiàn)，羊棲菜多糖可明顯促進(jìn)荷瘤小鼠的紅細(xì)胞免疫功能，對(duì)于血清中紅細(xì)胞免疫抑制因子和免疫促進(jìn)因子的含量或活性起到調(diào)節(jié)作用，對(duì)腹腔接種S180肉瘤和EAC癌和L615小鼠的可明顯促進(jìn)生存時(shí)間，促進(jìn)這些腹水型瘤小鼠的紅細(xì)胞免疫功能。羊棲菜多糖能減少L615小鼠全血和肝脾中脂質(zhì)過氧化物的含量并增加SOD、CAT的活性，抑制腫瘤生長(zhǎng)。

55、</p><p>　　本研究結(jié)果表明，羊棲菜多糖可增強(qiáng)小鼠的胸腺和脾臟的臟器指數(shù)，脾臟和胸腺作為機(jī)體最大的免疫器官，兩者相對(duì)重量的變化在免疫評(píng)價(jià)中占有重要的地位，胸腺是機(jī)體重要的中樞免疫器官，是機(jī)體淋巴細(xì)胞分化和成熟的主要器官，能產(chǎn)生淋巴細(xì)胞，并運(yùn)送到淋巴結(jié)和脾臟等處。這種淋巴細(xì)胞對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫具有重要作用。而脾臟是機(jī)體最重要的外周淋巴器官。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示給藥后小鼠脾指數(shù)明顯上升，胸腺指數(shù)也有提高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理現(xiàn)

56、實(shí)給藥組的脾臟與對(duì)照組有比較顯著性差異，羊棲菜多糖對(duì)小鼠免疫功能影響較顯著。羊棲菜多糖通過增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的介導(dǎo)作用顯著提高機(jī)體非特異性細(xì)胞免疫功能和特異性的體液免疫功能。機(jī)體調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的重要活性細(xì)胞是T細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞，它們可通過細(xì)胞毒作用、吞噬作用抑制和殺傷靶細(xì)胞。通過測(cè)定ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，可反映體內(nèi)的免疫狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，羊棲菜多糖組可明顯促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。</p>

57、<p>　　4.3 羊棲菜多糖作為保健藥物的開發(fā)前景</p><p>　　以往的研究表明，羊棲菜多糖對(duì)小鼠的肝臟具有一定的保護(hù)作用，可明顯刺激小鼠機(jī)體的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，可通過增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的介導(dǎo)作用顯著提高機(jī)體非特異性細(xì)胞免疫功能和特異性的體液免疫功能。同時(shí)，羊棲菜多糖還具有抗衰老，抗腫瘤，抗病毒等作用。在對(duì)羊棲菜多糖抗氧化性的研究中發(fā)現(xiàn)，羊棲菜多糖能夠?qū)弓h(huán)磷酰胺的免疫抑制，并能克

58、服環(huán)磷酰胺的免疫抑制保護(hù)器官，提高器官的抗氧化能力。目前已有不少多糖類化合物作為抗腫瘤免疫治療藥物應(yīng)用于臨床，如云芝多糖、香菇多糖、裂褶多糖等。通過眾多研究表明，羊棲菜多糖的藥用價(jià)值明顯，羊棲菜多糖對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異性免疫均起著不同程度的增強(qiáng)作用，其免疫促進(jìn)作用明顯，且毒副作用小。由此，我們不難想象，羊棲菜多糖的應(yīng)用前景廣泛。它可作為抗衰老，提高免疫力的保健品的研制，也可用于抗腫瘤，調(diào)節(jié)免疫的新藥的開發(fā)。其藥用價(jià)值值得我們關(guān)注

59、，相信在不久的將來，羊棲菜多糖會(huì)更多的得到人們關(guān)注以及應(yīng)用。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 劉秀霞.微囊藻毒素及孔雀石綠對(duì)尼羅羅非魚原代肝細(xì)胞的分子毒理學(xué)研究[D].暨南大學(xué)碩士論文,2009,13-18.</p><p>　　[2] Pflugmacher S.Wiegand C,Oberemm A

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70、;p>　　本課題是在導(dǎo)師的悉心指導(dǎo)下完成的。在近一年的科研當(dāng)中，導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，求實(shí)的工作作風(fēng)，執(zhí)著于探索未知，追求真理的科研精神，已深深地烙在了我的腦海里，將時(shí)刻指引我今后的工作和學(xué)習(xí)。這一年來，導(dǎo)師對(duì)我傾注了大量的心血，在實(shí)驗(yàn)階段，每一次的指導(dǎo)都讓我受益匪淺，在后期論文的開展和寫作上給予耐心的指導(dǎo)，讓我順利完成，在生活中也給予無微不至的關(guān)懷。謹(jǐn)此之際，對(duì)導(dǎo)師的諄諄教誨和精心培養(yǎng)表示衷心的感謝和最誠摯的敬意。</p&g

71、t;<p>　　雖然是短短的一年的時(shí)間，但是我的每一次進(jìn)步都離不開浙江萬里學(xué)院實(shí)驗(yàn)室的大力支持和幫助。在試驗(yàn)過程中，得到了很多老師的關(guān)心和幫助，其中有葛老師，陳老師等，他們對(duì)我實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌倪M(jìn)行提供了很大的幫助。本論文的完成得到了吳淼龍，俞杭，楊義右等同學(xué)的幫助。在此表示衷心的感謝！</p><p>　　最后，對(duì)參加論文評(píng)閱和答辯工作的專家組和所有幫助關(guān)心過自己的老師、同學(xué)和朋友致以衷心的感謝和誠摯