花粉管介導(dǎo)hrpN-,Ecc-基因轉(zhuǎn)化大白菜的研究.pdf

1、大白菜（BrassicacampestrisL.ssp.pekinensis）原產(chǎn)于中國，是我國蔬菜栽培中分布最廣，種植面積最大的蔬菜作物之一。大白菜軟腐病是大白菜生產(chǎn)中的三大主要病害之一，主要由胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜亞種（Erwiniacarotovorasubsp.carotovora）引起。由于大白菜資源中缺少抗性材料，以及對植物抗病機(jī)制認(rèn)識的匾乏，軟腐病抗病育種一直是蔬菜育種的重大難題。近年來植物基因工程等生物技術(shù)的進(jìn)步和成熟

2、，特別是一些抗病基因在植物抗病性改良方面的成功應(yīng)用，為大白菜抗病育種提供了一條新的、更有效的途徑。
　　 Harpins是植物革蘭氏陰性病原細(xì)菌分泌的一類富含甘氨酸、不含半胱氨酸、親水和熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)的總稱。外源施用能誘導(dǎo)對真菌、細(xì)菌和病毒病害的廣譜抗性。本研究通過花粉管通道法和花序滲透法將胡蘿卜軟腐歐文氏菌的hrpNEcc基因?qū)氪蟀撞耍谕@得抗病轉(zhuǎn)基因植株，為大白菜的抗病育種奠定理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　 1.根

3、據(jù)已經(jīng)發(fā)表的序列設(shè)計特異性引物，從胡蘿卜軟腐歐文氏菌中克隆出hrpNEcc基因，經(jīng)上海生工測序后登陸Genbank進(jìn)行BLAST比對，結(jié)果證明與原始基因序列相似性達(dá)到93％，蛋白一致性達(dá)到98％。
　　 2.構(gòu)建了含有CaMV35組成型啟動子且可轉(zhuǎn)錄hrpNEcc基因的植株表達(dá)載體pBBBast-hrpNEcc并將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中；
　　 3.探索了大白菜花粉管通道法的轉(zhuǎn)化條件。結(jié)果表明植株的基因型和導(dǎo)入時間對