豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染豬肺泡巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜差異研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬嚴(yán)重繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為特征的傳染病。PRRS自1987年首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)于美國(guó)以來，現(xiàn)已遍及世界各主要養(yǎng)豬國(guó)家與地區(qū)，并已成為危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一。
　　 豬肺泡巨噬細(xì)胞是PRRSV的重要靶細(xì)胞，研究病毒與其靶細(xì)胞之間的相互作用關(guān)系是理解病毒致病機(jī)制及其免疫學(xué)的重要基礎(chǔ)。同時(shí)巨噬細(xì)胞又是重要的免疫細(xì)胞，研究PRRS

2、V感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞功能的影響，有利于解釋PRRSV與宿主免疫系統(tǒng)之間的作用，并有助于闡釋PRRSV引起持續(xù)性感染和免疫抑制的機(jī)制，這對(duì)于闡明PRRSV的致病性和致病機(jī)理具有重要的理論意義。
　　 目前，基因芯片已被越來越廣泛的應(yīng)用于病原與宿主相互關(guān)系的研究，特別是基因芯片高通量的特點(diǎn)能夠一次獲得大量信息，可以為后續(xù)研究指明方向。
　　 鑒于此，本課題利用包含23256個(gè)轉(zhuǎn)錄本的Affymetrix豬基因芯片對(duì)正常豬肺

3、泡巨噬細(xì)胞與PRRS病毒感染豬肺泡巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜差異進(jìn)行研究，旨在檢測(cè)分析PRRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜中的差異表達(dá)基因，探討PRRSV的免疫學(xué)原理及致病機(jī)制，對(duì)PRRSV感染過程中發(fā)生的分子變化能夠得到全面的認(rèn)識(shí)以期為病毒與宿主的相互作用研究奠定基礎(chǔ)。
　　 主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 利用基因芯片技術(shù)分析了豬肺泡巨噬細(xì)胞在PRRSV侵襲后的基因表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)在6小時(shí)和24小時(shí)差異表達(dá)基因數(shù)量分別達(dá)到了2

4、640和3356，占全芯片基因數(shù)量的百分比分別為13.09％和16.64％。其中在6小時(shí)發(fā)生上調(diào)的基因數(shù)量為1235，下調(diào)基因數(shù)量為1495，而上調(diào)兩倍以上的基因數(shù)量為619，下調(diào)兩倍以上基因數(shù)量為435，在24小時(shí)發(fā)生上調(diào)的基因數(shù)量為1746，下調(diào)基因數(shù)量為1619，而上調(diào)兩倍以上的基因數(shù)量為922，下調(diào)兩倍以上基因數(shù)量為773。篩選出重要的差異表達(dá)基因，尤其是與免疫應(yīng)答，炎癥反應(yīng)，細(xì)胞凋亡等相關(guān)基因的變化情況。對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行歸類

5、，如IFN基因，IFN效應(yīng)基因，IFN信號(hào)基因，白介素相關(guān)基因，CD分子相關(guān)基因，HSP相關(guān)基因，趨化因子相關(guān)基因和Toll樣受體相關(guān)基因。利用Genmapp生物信息學(xué)軟件繪制基因芯片中與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因相互作用的網(wǎng)絡(luò)途徑。用42對(duì)基因引物對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行Real-time RT-PCR驗(yàn)證，有38條基因符合芯片結(jié)果。
　　 通過Real-time RT-PCR，系統(tǒng)分析了WuH1株P(guān)RRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞后6h與24h兩時(shí)間

6、點(diǎn)15種趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平：CCL2-5，CCL8，CCL19，CCL20，CCL27．CCL28，CXCL2，CXCL8，CXCL10，CXCL12，CXCL14和CX3CL1。結(jié)果表明CC趨化因子家族中CCL2，CCL3，CCL4，CCL5，CCL8，CCL20和CCL28均有明顯的差異表達(dá)。具有征募Th1和Th2細(xì)胞功能的趨化因子Rantes，MCP-1和MCP-2在病毒感染早期即被誘導(dǎo)表達(dá)。其中Rantes和MCP-2的mRNA