豬繁殖與呼吸綜合征病毒與豬圓環(huán)病毒2型共感染對(duì)豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)和豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2)是可以導(dǎo)致感染豬發(fā)生免疫抑制的兩種病毒。本研究通過(guò)分析PRRSV和PCV2共感染豬體內(nèi)病毒含量和血清抗體水平、外周血白細(xì)胞亞群以及外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄的動(dòng)態(tài)變化，揭示PRRSV和PCV2共感染對(duì)豬免疫功能

2、影響的細(xì)胞和分子機(jī)制。 應(yīng)用RT-PCR/PCR技術(shù)，分別擴(kuò)增并克隆PRRSV、PCV2和豬細(xì)胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α和β-actin的部分基因片段，獲得了各種分子的陽(yáng)性重組質(zhì)粒。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法(Real-timeFQ-PCR)，建立了這些病毒和細(xì)胞因子的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其直線回歸方程，并確定其最適讀板溫度。 20頭6周齡普通豬被

3、分成空白對(duì)照組、PRRSV或PCV2單感染組以及PRRSV和PCV2共感染組4個(gè)組，每組5頭。攻毒后，采用Real-timeFQ-PCR技術(shù)對(duì)感染豬血清、組織器官、PBMCs中的病毒含量進(jìn)行檢測(cè)，采用間接ELISA法對(duì)血清中的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，采用MTT法對(duì)外周血淋巴細(xì)胞(PBLCs)的增殖能力進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，PRRSV和PCV2共感染組血清、組織器官、PBMCs中PRRSV的含量均顯著高于PRRSV單感染組，PCV2的含量均顯著

4、高于PCV2單感染組；PRRSV和PCV2共感染組血清中PRRSV、PCV2特異性抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)的時(shí)間晚于并且水平低于PRRSV或PCV2單感染組；共感染和單感染組PBLCs增殖能力受到抑制的嚴(yán)重程度依次為：PRRSV/PCV2組＞PRRSV組＞PCV2組。由此表明，PRRSV和PCV2在豬體內(nèi)的增殖具有相互促進(jìn)作用，對(duì)感染豬體液免疫和細(xì)胞免疫的抑制具有加重作用。 采用血常規(guī)法、CD21和SWC3a單色流式細(xì)胞術(shù)以及CD3/CD4/C

5、D8三色流式細(xì)胞術(shù)對(duì)PRRSV、PCV2單感染和共感染豬外周血白細(xì)胞亞群的含量進(jìn)行分析。結(jié)果表明，PRRSV和PCV2共感染組在感染早期(10DPI前)各類白細(xì)胞亞群含量比單感染組顯著下降，白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞、Tc細(xì)胞、活化/記憶T細(xì)胞下降特別明顯；此后各類白細(xì)胞亞群含量逐漸上升，絕大多數(shù)在14～35DPI間顯著升高。由此表明，在病毒感染早期，PRRSV和PCV2共感染可導(dǎo)致比單感染更加嚴(yán)重的免疫抑制，PRRSV和PC

6、V2共感染對(duì)機(jī)體的免疫抑制具有加重作用。 采用Real-timeFQ-PCR技術(shù)對(duì)PRRSV、PCV2單感染和共感染豬PBMCs中促炎細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)、Th1型細(xì)胞因子(IL-2、IL-12p40、IFN-γ)以及Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析。結(jié)果表明，PRRSV和PCV2共感染導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子、Th1型和Th2型細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的下調(diào)比