鯽魚(yú)GABAA受體β3亞基基因的克隆與分析.pdf

1、γ-氨基丁酸受體(GABAR)主要存在于脊椎動(dòng)物和非脊椎動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中，是氟蟲(chóng)腈、阿維菌素、硫丹和林丹等殺蟲(chóng)劑的作用靶標(biāo)，也是治療癲癇、酒精中毒、精神分裂癥與帕金森氏癥等疾病的醫(yī)藥作用靶標(biāo)，所以受到國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界的高度重視。實(shí)驗(yàn)研究表明阿維菌素、氟蟲(chóng)腈等農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)等水生生物為高毒，本實(shí)驗(yàn)旨在克隆、純化魚(yú)類(lèi)GABA受體亞基，并結(jié)合生物信息學(xué)與化學(xué)生物學(xué)手段研究其氨基酸序列和立體結(jié)構(gòu)信息。
　　本文運(yùn)用生物信息學(xué)方法在N

2、CBI基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中找到已經(jīng)公布的GABAA受體β3基因序列，通過(guò)多序列同源比對(duì)尋找高度保守區(qū)，根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物，運(yùn)用RTPCR和RACEPCR技術(shù)，成功地克隆鯽魚(yú)(Carassiusauratus)GABAA受體β3基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并被GenBank收錄(登錄號(hào):KC964110)，該基因長(zhǎng)2767bp，開(kāi)放閱讀框(ORF)為1506bp，編碼502個(gè)氨基酸，與已知的其他物種β3亞基具有高度的相似性。通過(guò)qRT-P

3、CR擴(kuò)增檢測(cè)到該基因在鯽魚(yú)不同組織器官差異性表達(dá)。我們以線蟲(chóng)體內(nèi)對(duì)阿維菌素敏感的谷氨酸門(mén)控氯離子通道受體蛋白的α亞基(PDBID:3RHW)作為模板，用DS(DiscoveryStudio)模擬鯽魚(yú)GABAA受體β3亞基的同源五聚體結(jié)構(gòu)，優(yōu)化結(jié)構(gòu)模型并與農(nóng)藥配體做小分子對(duì)接，計(jì)算其作用模式和結(jié)合能力。研究魚(yú)類(lèi)GABAA受體β3亞基與農(nóng)藥分子的作用，闡明提高GABA受體拮抗劑類(lèi)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)安全性的分子作用機(jī)理。為進(jìn)一步研究GABAA受體β3