大豆抗蟲基因轉(zhuǎn)移及其轉(zhuǎn)化系統(tǒng)優(yōu)化研究.pdf

1、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)成功地將Bt基因（cryLA）導(dǎo)入大豆。從發(fā)芽5-7天的大豆無菌苗切取子葉節(jié)外植體，經(jīng)農(nóng)桿菌感染和共培養(yǎng)后，在選擇培養(yǎng)基上4周左右出現(xiàn)抗性不定芽。將不定芽轉(zhuǎn)移到芽伸長培養(yǎng)基上，4-6周后再生苗長至2.5-3cm高。再將再生苗切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，2周左右生根。生根后的再生植株經(jīng)逐步鍛煉移入盆中，所有植株均能正常開花結(jié)莢。在移栽成活的8株T_0植株中有7株P(guān)CR檢測呈陽性反應(yīng)；在7個T_1株系中有4個株系存

2、在PCR陽性植株。取4個穩(wěn)定遺傳的T_1代株系內(nèi)的陽性植株的葉片提取DNA，用地高辛標(biāo)記的Bt基因探針進(jìn)行Southern雜交分析，結(jié)果4個株系均呈現(xiàn)陽性，證明Bt基因已整合到受體大豆的基因組內(nèi)并能傳遞給后代。轉(zhuǎn)基因植株的葉片能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上形成愈傷組織；轉(zhuǎn)基因植株的葉片和莖切片能被X-Gluc不同程度地染色；苜蓿夜蛾幼齡幼蟲的接種鑒定，有兩個轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)出明顯的抗蟲性。這些結(jié)果證明被轉(zhuǎn)的nptⅡ、gus和Bt基因均在轉(zhuǎn)基因植