大豆WRKY基因轉(zhuǎn)化煙草(Nicotiana tabacum)的研究.pdf

1、WRKY蛋白是近年才發(fā)現(xiàn)的一類轉(zhuǎn)錄因子家族，廣泛參與植物對(duì)生物與非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)。在生物脅迫、防衛(wèi)反應(yīng)信號(hào)分子、干旱、低溫、創(chuàng)傷和重金屬等不同的環(huán)境脅迫條件下能被誘導(dǎo)表達(dá)，同時(shí)參與植物發(fā)育進(jìn)程中多種基因的表達(dá)和代謝的調(diào)控。
　　本研究以野生型煙草(Nicotiana tabacum)為試驗(yàn)材料，通過根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的向煙草導(dǎo)入大豆WRKY基因HY22-2和HY23-2基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究。試驗(yàn)結(jié)果表明：用 OD600為

2、0.5的農(nóng)桿菌侵染5mi，共培養(yǎng)3天條件下，獲得的28株轉(zhuǎn)HY22-2基因卡那霉素抗性植株，經(jīng)PCR檢測(cè)，7株擴(kuò)增出特異條帶，轉(zhuǎn)化率為17.5％；獲得的35株轉(zhuǎn)HY23-2基因卡那霉素抗性植株，經(jīng)PCR檢測(cè)，9株擴(kuò)增出特異條帶，轉(zhuǎn)化率為21.7%。用RT-PCR法檢測(cè)PCR獲得的陽性植株，結(jié)果均擴(kuò)增出目的條帶，說明目的基因 HY22-2和HY23-2已整合到煙草的基因組中并表達(dá)。
　　本研究從非生物脅迫，鹽和低溫兩個(gè)方面對(duì)轉(zhuǎn)基因煙