利用藍(lán)色溫和電泳分析鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜蛋白質(zhì)組.pdf

1、以粳稻推廣品種徐稻三號(hào)為材料，通過(guò)兩相分配法提取根尖細(xì)胞高純度質(zhì)膜，并利用 BN/SDS-PAGE電泳對(duì)鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜蛋白質(zhì)進(jìn)行了比較研究，結(jié)合LC-MS/MS質(zhì)譜分析，鑒定了質(zhì)膜蛋白質(zhì)組中的脅迫響應(yīng)蛋白；然后利用半定量RT-PCR對(duì)鑒定的蛋白質(zhì)在轉(zhuǎn)錄水平的變化進(jìn)行了分析，主要研究結(jié)果如下：
　　 1.鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜蛋白的BN/SDS-PAGE分析
　　 150mM NaCl處理水培水稻根尖發(fā)現(xiàn)鹽脅迫顯著抑制

2、根的生長(zhǎng)，利用葡聚糖-聚乙二醇兩相分配法分離純化得到高純度質(zhì)膜組分，并進(jìn)行BN/SDS-PAGE分析，經(jīng)光密度掃描和定量分析，發(fā)現(xiàn)18個(gè)蛋白差異點(diǎn)，其中有7個(gè)蛋白質(zhì)（包括膜通道蛋白，水孔蛋白，細(xì)胞質(zhì)型蘋(píng)果酸脫氫酶，細(xì)胞色素P450，H+-ATPase，醛縮酶和烯醇化酶）在150mM NaCl處理24h和48h的脅迫條件下呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，4個(gè)蛋白質(zhì)（包括蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶，磷酸丙糖異構(gòu)酶，蛋白酶體α亞基和GDP解離抑制蛋白）在24h和48h

3、呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)；還有4個(gè)蛋白質(zhì)（包括谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶，14-3-3蛋白，血紅素過(guò)氧化物酶和蔗糖合成酶）在150mmol NaCI脅迫24h條件下，呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)，而在48h呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)。質(zhì)譜鑒定表明18個(gè)被鑒定蛋白中有15個(gè)為質(zhì)膜相關(guān)蛋白，來(lái)自其它細(xì)胞器的污染蛋白僅有3個(gè)，其中很多蛋白涉及很多重要的生理過(guò)程：（1）能量代謝，包括參與糖酵解途徑的果糖二磷酸醛縮酶同工酶C-1，磷酸丙糖異構(gòu)酶以及烯醇化酶；調(diào)控UDPG產(chǎn)生的蔗糖合成酶。（2）離

4、子動(dòng)態(tài)平衡，包括參與離子運(yùn)輸?shù)腍+-ATPase；調(diào)節(jié)質(zhì)膜H+-ATPase活性和離子通道控制的14-3-3蛋白以及水通道蛋白等。（3）細(xì)胞防御，包括參與活性氧清除的血紅素過(guò)氧化物酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等。
　　 2.鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜差異表達(dá)蛋白轉(zhuǎn)錄水平變化
　　 在上述基礎(chǔ)上利用半定量RT-PCR的方法對(duì)BN/SDS-PAGE分離鑒定的部分蛋白進(jìn)行轉(zhuǎn)錄水平的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大部分下調(diào)的蛋白在鹽處理時(shí)其mRNA的表達(dá)