虎紋捕鳥蛛毒素組學和大鼠海馬突觸質膜蛋白質組學研究.pdf

1、第一部分虎紋捕鳥蛛毒素組學研究 虎紋捕鳥蛛(Ornithoctonus huwena Wang)分布在中國南方的云南和廣西一帶，是中國毒性最強的蜘蛛之一，其毒液中富含各種蛋白質與多肽成份。從虎紋捕鳥蛛毒液中已經鑒定到包括虎紋毒素-1、虎紋凝集素-1等多種多肽毒素，為進一步了解虎紋捕鳥蛛毒素的組成以及其致毒機理并為將來從中篩選有開發(fā)潛力且具有藥理學意義的分子，我們采取蛋白質組學的方法對其粗毒進行了全面的分析。 為便于分析，

2、我們采取分子篩層析首先將粗毒分為分子量>10kDa的蛋白質組分和分子量<10 kDa的多肽類組分。對于蛋白質組分，我們采用一維電泳(SDS-PAGE)和二維雙向凝膠電泳(2DE)進行分離，經基質輔助激光解吸飛行時間串聯質譜(MALDI-TOF-TOF)以及液相電噴霧四級桿時間飛行質譜(LC-ESI-Q-TOF)鑒定，總共鑒定了90個蛋白質點，其中包括：有重要意義的酶、結合蛋白以及具有重要生物學功能的蛋白質。對于虎紋捕鳥蛛毒素中的多肽類組

3、分，采用陽離子交換色譜及反相高效液相色譜進行分離，通過質譜MALDI-TOF-TOF進行檢測，總計發(fā)現有超過130種不同分子量的成分存在，其中47條多肽采用Edman降解測序方法進行了測序。 本研究首次全面分析了虎紋捕鳥蛛毒素的組成，揭示了蜘蛛毒素種類及功能的復雜性和多樣性，為深入研究虎紋捕鳥蛛毒素的組成，進化，以及毒素分子結構與功能的關系奠定了基礎。 第二部分大鼠海馬突觸質膜蛋白質組學研究 神經系統是生命活動中

4、起著整合和調節(jié)作用的信息系統，海馬是神經系統中與生物的各項感覺、運動、學習、記憶等功能有著密切關聯的組織。神經元是神經系統的結構和功能單位，具有接受、整合和傳遞信息的功能。神經元發(fā)出和接受神經沖動的基本結構是突觸，它是神經元與神經元之間相互接觸的部位。當受到外界刺激后，神經遞質從突觸前的神經元軸突末端被釋放并與突觸后目標神經元上的受體相結合。突觸的質膜上分布有許多與信號傳導等功能相關的蛋白質。本文為鑒定大鼠海馬突觸質膜蛋白質，利用不連續(xù)

5、蔗糖密度梯度分離純化得到樣品，采用兩向 Blue Native-PAGE/SDS-PAGE電泳分離突觸質膜蛋白質，結合HCT質譜對其進行鑒定分析。我們一共鑒定到281個非冗余蛋白質，具有1個或多個跨膜區(qū)的蛋白質約占36％，與信號轉導功能相關的蛋白質占13.3％。 本研究是第一次運用蛋白質組學技術對大鼠海馬突觸質膜蛋白質進行分析，其結果表明Blue Native-PAGE/SDS-PAGE是一種有效地分離膜蛋白質的手段，并且為進一