結(jié)腸癌黏膜及其細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、答辯委員會(huì)主席：崔太搓教援答辯委員會(huì)成員：廑坐堡數(shù)援鮭適進(jìn)教援溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)腸癌黏膜及其細(xì)胞質(zhì)膜的蛋白質(zhì)組學(xué)研究摘要目的：通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較不同時(shí)期結(jié)腸黏膜組織的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，以期篩選出與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程相關(guān)的蛋白質(zhì)，為結(jié)腸癌的診斷和防治提供新的靶標(biāo)。方法：l、小鼠結(jié)腸癌模型建立與驗(yàn)證：利用氧化偶氮甲烷(Azoxymethane，AOM)和葡聚糖硫酸鈉鹽(Dextransodiumsulfate，DSS)構(gòu)建炎癥相關(guān)

2、結(jié)腸癌小鼠模型，同時(shí)設(shè)SPF級(jí)健康對(duì)照組。在造模期間，觀察小鼠是否出現(xiàn)腹瀉、便血及體重改變等癥狀，并定期對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行病理檢測(cè)以觀察結(jié)腸組織病理變化情況。分別于造模第7、12、14周進(jìn)行結(jié)腸組織取材，肉眼觀察結(jié)腸大體形態(tài)改變，鏡下觀察病理組織學(xué)改變。2、基于2DELCMS／MS的方法分析結(jié)腸黏膜蛋白質(zhì)組：從1)中小鼠模型剝離炎癥期(第七周)和非典型期(第十二周)的結(jié)腸黏膜組織，且鏡下檢查黏膜的純度。提取黏膜組織蛋白質(zhì)進(jìn)行雙向凝

3、膠電泳(Twodimensionalgelelectrophoresis，2DE)分離及考馬斯亮藍(lán)染色2DE膠。ImageScanner掃描儀掃描2DE膠獲取圖像，并應(yīng)用ImageMaster2Dsoftware分析圖像中蛋白質(zhì)點(diǎn)。尋找出的有意義差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)酶解成肽段后采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LCMS／MS)分離并鑒定。鑒定出的差異表達(dá)蛋白質(zhì)運(yùn)用GO數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行差異蛋白質(zhì)功能分析及STRING軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用分析。綜合生物信

4、息學(xué)分析結(jié)果及文獻(xiàn)調(diào)研，篩選出其中8個(gè)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，然后選取在蛋白質(zhì)和mRNA水平上表達(dá)一致的3個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫印跡(WestemBlot，WB)分析。3、基于iTRAQ標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析結(jié)腸黏膜細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組：從1)中小鼠模型分離腫瘤期(第十四周)結(jié)腸黏膜及腫瘤組織，純化組織質(zhì)膜蛋白質(zhì)，并檢測(cè)質(zhì)膜蛋白質(zhì)純度。質(zhì)膜蛋白質(zhì)經(jīng)胰酶消化后，應(yīng)用相對(duì)和絕對(duì)定量同位素標(biāo)記(isobarictagsforrela