大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組及敬釗纓毛蛛毒素組研究.pdf

1、湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組及敬釗纓毛蛛毒素組研究姓名：曹佳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張東裔梁宋平20070501第二部分敬釗纓毛蛛毒素組學(xué)研究敬釗纓毛蛛(Chilobrachysjingzhao)是近年在中國海南省發(fā)現(xiàn)的一蜘蛛新種，屬于捕鳥蛛科，性兇猛，其毒液對小鼠具有致命性(IC50為04mg／kg)。為了解敬釗纓毛蛛毒素的組成以及其致毒機(jī)理，而且也為將來從中篩選有開發(fā)潛力的分子，我

2、們采取蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對敬釗纓毛蛛毒素進(jìn)行了全面的分析。為便于分析，我們采取分子篩層析首先將粗毒分為分子量10kDa的蛋白質(zhì)組份和分子量10kDa的多肽類組份。對于蛋白質(zhì)組份，我們采用二維雙向凝膠電泳(2DE)進(jìn)行分離，獲得90個蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDITOFTOFMS)以及液相電噴霧四級桿時間飛行質(zhì)譜(LCESIQTOFMS)分析，結(jié)合常規(guī)Mascot搜庫和MSBLAST搜索，總共鑒定了54個蛋白質(zhì)點(diǎn)。

3、其中主要有各種酶類，高分子量毒素類，血藍(lán)蛋白，以及未知蛋白等。對于敬釗纓毛蛛毒素中的多肽類組份，采用陽離子交換色譜及反相高效液相色譜進(jìn)行分離，通過MALDI1DFMS以及Edman降解進(jìn)行多肽鑒定總計發(fā)現(xiàn)有超過120種多肽成分存在，其分子量主要集中在28kDa，其中31種多肽獲得其全序列，29種多肽得到其N端部分序列。序列比對表明，大多數(shù)敬釗纓毛蛛毒素多肽與來源于其他捕鳥蛛科的多肽毒素有較高的序列同源性，其中主要是各種電壓門控鈉和鉀離子