花椰菜Fe-SOD、CAT、Tub基因和青花菜Tub基因cDNA的克隆及分析.pdf

1、本試驗以青花菜和花椰菜的花、根為材料,應(yīng)用RT-PCR及RACE技術(shù),克隆出Fe-SOD和Tub基因的全長及CAT基因的片段,為進一步從分子水平探討抗氧化酶的抗氧化和抗逆機理,揭示微管蛋白的生理功能,為今后青花菜和花椰菜的抗逆育種奠定理論基礎(chǔ)。
　　 1.獲得花椰菜Fe-SOD基因cDNA全長
　　 以花椰菜根為材料,提取RNA,利用RT-PCR及RACE技術(shù),克隆獲得Fe-SOD基因(登錄號為JF720320)cDNA

2、全長,包含971bp,編碼212個氨基酸,分子量為23902.0,等電點(PI)5.97。
　　 經(jīng)Blast軟件比對,結(jié)果表明,該序列與蕪菁(Brassica rapa)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)的同源性均在85％以上。編碼的氨基酸比對顯示,與蕪菁(Brassica rapa)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)、茄子(Eggplant)、木欖(Bruguieragymnorhiza)

3、、百脈根(Lotus japonicus)的同源性均在90％以上。
　　 2.獲得花椰菜CAT基因cDNA片段
　　 花椰菜根部克隆得到長度為1207bp的CAT基因片段,GeneBank登錄號為JF720325,該片段與擬南芥(Arabidopsis thaliana)、芥菜(Brassica juncea)、甘藍(Brassica oleracea)、辣椒(Capsicum annuum)、桃(Prunus pers

4、ica)cDNA的同源性較高,分別為87％、82％、81％、81％、79％,而且序列編碼340個氨基酸。
　　 3.獲得花椰菜Tub基因cDNA全長
　　 花椰菜花為材料,獲得Tub基因cDNA全長分別為1631bp(登錄號為JF720321),開放閱讀框能夠編碼446個氨基酸,分子量為50286.5,等電點4.81。
　　 Blast軟件比對,結(jié)果表明,花椰菜花Tub基因cDNA全長與擬南芥(Arabidops

5、is thaliana)、楊毛果(Populus trichocarpa)、玉米(Zea mays)、陸地棉(Gossypium hirsutum)的同源性分別為88％、83％、82％、80％。編碼的氨基酸比對顯示,與擬南芥(Arabidopsis thaliana)、大W(glycine max)、狗尾草(setaria viridis)、陸地棉(Gossypium hirsutum)、玉米(Zea mays)的同源性均在90％以上。

6、
　　 從花椰菜根中克隆得到一條全長1640bp的序列,GeneBank登錄號為JF720322,分子量為23520.6,等電點5.01,序列編碼212個氨基酸。與花椰菜花中獲得的Tub基因cDNA全長比對證明兩者是基本相同的,屬同一基因,相似性在95％以上。
　　 4.青花菜Tub基因cDNA片段
　　 在青花菜花中克隆得到的Tub基因cDNA片段長度分別為970bp,與其它植物比對發(fā)現(xiàn),青花菜的花與擬南芥(A

7、rabidopsis thaliana)、燕麥(Oat)、大豆(glycine max)、玉米(Zea mays)、水稻(Rice)、蓖麻(Ricinus communis)、小麥(Triticum aestivum)的同源性均在82％以上,同源性較高。GeneBank登錄號為JF720323,該序列編碼253個氨基酸。
　　 從青花菜根中獲得Tub基因cDNA的保守序列,GeneBank登錄號為JF720324,序列編碼202